江西省科技厅重点攻关项目(20041B0302100)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：程晓曙王耀晟杨人强王伶李萍更多>>
- 相关机构：南昌大学第二附属医院武警江西总队医院江西医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：江西省科技厅重点攻关项目国家科技支撑计划江西省研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达hVEGF121/EGFP融合蛋白骨髓间充质干细胞的制备及缺氧干预被引量：3
- 2008年
- 目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的人血管内皮细胞生长因子121的真核质粒,检测所制备的表达hVEGF121/EGFP融合蛋白的骨髓间充质干细胞在不同时长缺氧后血管内皮细胞生长因子的水平。方法:设计携带酶切位点的扩增引物,通过PCR技术扩增人血管内皮细胞生长因子121编码基因全序列,以粘端连接克隆法将其编码片段定向连接入质粒载体pEGFP-N2的多克隆位点中,构建pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒,采用酶切法、PCR以及DNA序列测定法鉴定所构建的重组质粒。全骨髓差速贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,体外扩增传代,通过形态学观察及表面标记物进行细胞鉴定。通过阳离子脂质体介导pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒转染体外培养的骨髓间充质干细胞,使用荧光显微镜检测hVEGF121/EGFP融合蛋白的表达。将制备好的表达hVEGF121/EGFP融合蛋白的骨髓间充质干细胞在体外缺氧环境下分别培养6,12,24h,另设相同缺氧干预下的空白骨髓间充质干细胞组,以转染空载pEGFP-N2质粒的骨髓间充质干细胞组作为对照,采用RT-PCR法检测血管内皮生长因子mRNA的表达量。结果:酶切鉴定法、PCR鉴定法、DNA序列测定皆证实pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒构建成功。使用pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒转染骨髓间充质干细胞后,荧光显微镜检测提示hVEGF121/EGFP蛋白在骨髓间充质干细胞中存在表达。在体外模拟心肌缺氧的环境下分别培养6,12,24h后,RT-PCR检测示转染重组质粒的骨髓间充质干细胞组各时间段缺氧后的血管内皮生长因子mRNA表达量均高于对照组(P<0.01),且不同时间段间差异无显著性意义(P>0.05);空白骨髓间充质干细胞的血管内皮生长因子mRNA表达量随缺氧时程的延长而增加。结论:①成功构建携带人VEGF121/EGFP融合蛋白表达基因的真核表达质粒,并在骨髓间充质干细胞中获得表达。②证实表达hVEGF121/EGFP融合蛋白的骨�
- 王耀晟王伶杨人强程晓曙
- 关键词：血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白真核表达质粒缺氧
- 干细胞在心血管疾病中的应用
- 2005年
- 干细胞在心血管疾病可分化成心肌细胞,减少缺血心肌,改善心功能。现概述目前临床可用的细胞移植种类、方法和应用范围。
- 杨人强刘晨程晓曙
- 关键词：细胞移植心血管疾病
- 骨髓间充质干细胞在缺氧条件下VEGF的表达规律被引量：1
- 2009年
- 目的:研究骨髓间充质干细胞在不同时长缺氧下血管内皮生长因子的表达规律。方法:建立体外模拟缺氧微环境装置,将骨髓间充质干细胞分别缺氧培养0、6、12、24h,以RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达水平。结果:不同缺氧时长下骨髓间充质干细胞的VEGF mRNA表达水平为:0h组<6h组<12h组<24h组。结论:在24h以内的缺氧下,骨髓间充质干细胞的VEGF mRNA表达水平随缺氧时程的延长而增高,呈缺氧时长依赖性。
- 王耀晟程晓曙王伶杨人强李萍
- 关键词：骨髓间充质干细胞缺氧血管内皮生长因子
- 骨髓间充质干细胞表达的hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白的提纯及功能鉴定
- 2009年
- 目的:用hVEGF121/EGFP真核质粒转染骨髓间充质干细胞,提纯其表达的hVEGF121/EGFP融合蛋白,并体外检测其功能。方法:用课题组前期工作构建的pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒提取质粒DNA。通过阳离子脂质体介导pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒DNA转染体外培养的骨髓间充质干细胞,使用荧光显微镜检测hVEGF121/EGFP融合蛋白表达。用Amicon超滤离心管纯化融合蛋白。结果:荧光显微镜下观察到转染pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒的骨髓间充质干细胞,Westen blot证实转染骨髓间充质干细胞的培养液中存在hVEGF121/EGFP融合蛋白表达。MTT试验证实人脐静脉内皮细胞数量在hVEGF121/EGFP融合蛋白组明显多于对照组(P<0.05)。Miles实验证实hVEGF121/EGFP融合蛋白增加血管壁的通透性。结论:①携带hVEGF121/EGFP融合蛋白表达基因的真核表达质粒,在骨髓间充质干细胞中获得表达。②骨髓间充质干细胞表达的hVEGF121/EGFP融合蛋白在体外具有野生型血管内皮细胞生长因子的功能。
- 何力鹏王耀晟周仪华姜宇吴晓玲程晓曙
- 关键词：血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞融合蛋白
