国家教育部博士点基金(200803070021)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：侯加法周振雷邓益锋杨俊花江莎更多>>
- 相关机构：南京农业大学常熟市畜牧兽医站上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 荧光Real-time PCR鉴定鸡胸骨总RNA质量被引量：3
- 2012年
- 为了更准确地鉴定提取鸡骨总RNA的质量,试验分别用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳和荧光Real-time PCR检测评价3种不同的方法提取成年鸡胸骨总RNA的质量。结果显示,荧光Real-time PCR可更好地鉴定提取的骨总RNA的质量。用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳能粗略检测RNA的纯度和完整性,但不能反映提取过程中是否引起基因不均一的减少,所检测的纯度也不能精确反映RNA的反转录效率。
- 江莎孟凡周振雷邓益锋侯加法
- 关键词：胸骨RNA
- TRPV6在蛋鸡不同生殖器官组织的表达被引量：4
- 2012年
- 【目的】研究瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor6,TRPV6)在蛋鸡卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部的表达分布。【方法】本试验采用RT-PCR和免疫组化技术研究TRPV6在蛋鸡不同生殖器官的定性表达,同时采用Real-time PCR和Western blotting方法观察其表达量的变化。【结果】在卵巢,TRPV6蛋白主要分布在初级卵泡和次级卵泡。在输卵管的膨大部、峡部以及子宫部,TRPV6主要分布在黏膜上皮的纤毛上皮细胞游离端(面向管腔),其中子宫部黏膜上皮的基底层也有少量分布。另外,与卵巢组织相比,膨大部和峡部TRPV6 mRNA表达量显著降低(P<0.05)。同时,膨大部TRPV6蛋白含量也显著降低(P<0.05),子宫部组织TRPV6 mRNA水平低于卵巢,蛋白水平则相反,但均无统计学差异(P>0.05)。【结论】TRPV6在卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部均有表达,且卵巢和输卵管的子宫部表达量较高,提示TRPV6可能参与卵泡的发育成熟,对蛋鸡输卵管的子宫部Ca2+转运也具有重要意义。
- 杨俊花侯加法邓益锋周振雷王永梅施旅娟
- 关键词：卵巢输卵管峡部蛋鸡
- 蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备
- 2012年
- 为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。
- 郑燕玲杨俊花张建鹏江莎侯加法
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备
- 为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据基因序列,设计一对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1801至2176位置的375 bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将...
- 邓益锋郑燕玲杨俊花周振雷夏继飞侯加法
- 关键词：多克隆抗体原核表达纯化蛋鸡
- 文献传递
