浙江省自然科学基金(Y2110849)
- 作品数：3 被引量：27H指数：3
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- 三七皂苷对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞保护作用及其机制研究被引量：11
- 2015年
- [目的]从氧化应激及炎症角度观察三七皂苷(panax nologinoside,PNS)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cell,RMC)保护作用及从SIRT1/NF-κB信号通路探讨其机制。[方法]培养RMC,并将其分为4组:正常对照组、高糖组、PNS组及SIRT1RNAi+PNS组;采用MTT及Annexin V-FITC分别检测细胞活力及凋亡情况;采用Real-time PCR技术检测RMC SIRT1、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的m RNA表达;Western Blot技术检测SIRT1和乙酰化NF-κB P65蛋白的表达;采用经典的氮蓝四唑(NBT)显色法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、TGF-β1、丙二醛(malondialdehyde,MDA)等的浓度。[结果]与正常对照组比较,高糖刺激使RMC活力降低,细胞凋亡增加,SOD活性降低,MDA含量增加,SIRT1基因及蛋白表达降低,NF-κB P65蛋白乙酰化水平增高,TNF-α、TGF-β1的m RNA和蛋白水平增高。PNS干预可逆转高糖引起的上述变化,但沉默SIRT1基因后,PNS干预作用不明显。[结论]PNS对高糖诱导的RMC具有保护作用,其机制可能通过增加SIRT1表达及活性,降低NF-κB P65蛋白乙酰化水平,使其转录活性降低,进而抑制炎症及氧化应激。
- 杜月光章科娜姜雪儿柴可夫
- 关键词：三七皂苷系膜细胞
- SIRT1对高糖诱导的系膜细胞NF-κBp65乙酰化及MCP-1表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMC)核因子κB(NF-κB)p65蛋白乙酰化及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法构建干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒质粒pTRCshSIRT1并进行鉴定。将RMC分为高糖组(用高糖培养液培养)、白藜芦醇(SIRT1激活剂)+高糖组(用含1μmol/L白藜芦醇的低糖培养液培养24h后,换用高糖培养液培养)、SIRT1RNAi组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用低糖培养液培养)、SIRT1RNAi+高糖组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用高糖培养液培养),同时设正常对照组和甘露醇高渗对照组。以实时荧光定量PCR检测SIRT1、MCP-1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达,ELISA技术检测MCP-1蛋白含量。结果质粒测序证实干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,且能抑制RMC中SIRT1基因表达(P<0.01)。高糖刺激使RMC SIRT1基因表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化增强,MCP-1mRNA和蛋白水平增高;SIRT1激活剂白藜芦醇可逆转高糖引起的变化;而沉默SIRT1可促进高糖诱导的RMC NF-κB p56乙酰化及MCP-1mRNA和蛋白表达(P<0.05或0.01)。结论 SIRT1可抑制高糖诱导的RMC MCP-1表达,其机制可能与NF-κB p56去乙酰化有关。
- 杜月光柴可夫汪丽佩
- 关键词：NF-ΚB单核细胞趋化蛋白1肾小球系膜细胞
- SIRT1通过降低NF-κBp65乙酰化减轻高糖应激引起的大鼠肾小球系膜细胞损伤被引量：14
- 2014年
- 目的:研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞NF-κB p65蛋白乙酰化影响及其保护作用。方法:培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为5组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、白藜芦醇组和SIRT1 RNAi组。MTT比色法检测细胞活性;以实时荧光定量PCR检测SIRT1、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA水平;Western blotting检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平,ELISA检测MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1和丙二醛(MDA)的含量。结果:高糖刺激使肾小球系膜细胞的活力降低,超氧化物岐化酶(SOD)活性降低,MDA含量增加;SIRT1 mRNA及蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化水平增高,MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1mRNA和蛋白水平增高。白藜芦醇可逆转高糖引起的变化,而沉默SIRT1基因使高糖诱导的系膜细胞NF-κB p56乙酰化水平、MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1mRNA和蛋白水平升高。结论:高糖可降低SIRT1水平,增加炎症因子的表达。SIRT1的激活可使NF-κB的亚单位RelA/p65去乙酰化,从而抑制炎症因子的产生。SIRT1可作为治疗DN的潜在靶点。
- 杜月光柴可夫钱俊文章科娜
- 关键词：NF-KB
