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国家重点实验室开放基金(2060204): 作品数：57 被引量：118H指数：5; 相关作者：缪时英宋伟王琳芳沈亚领魏东芝更多>>; 相关机构：华东理工大学中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>

Streptomyces rimosus M4018中氧化应激转录抑制因子Rex的克隆表达及与rex操纵子的体外结合活性: 2012年; 【目的】为了研究龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M4018中的rex基因对自身rex operator(ROP)的调控机制。【方法】根据天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中rex基因的同源序列设计引物进行PCR,从S.rimosus M4018中获得其rex基因(Sr-rex)。同时,通过染色体步移的方法,获得其上游的ROP序列。采用体外凝胶迁移的方法,分析了Sr-Rex对ROP的调控作用。【结果】获取的Sr-rex基因核苷酸序列长度为846 bp,预测的编码氨基酸序列与S.coelicolor A3(2)中Rex的同源性为84%,获得GenBank登录号:GQ849479。圆二色光谱显示Sr-Rex的结构以α螺旋和β折叠为主,与软件预测相符。凝胶迁移实验表明,Sr-Rex能与S.rimosus M4108中扩增到的ROP片段特异性结合。同时,以Rex:ROP的最小结合序列为基础,设计了一条22 bp的单链DNA片段,和Sr-Rex的最大结合摩尔浓度比约为5:1。高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响。【结论】在S.rimosus M4108中,Rex是通过响应胞内NAD(H)水平的方式来调控ROP的表达的。; 沈晶唐振宇肖慈英郭美锦; 关键词：龟裂链霉菌氧化应激基因克隆和表达

TRIM69可抑制紫外线和依托泊苷刺激时HeLa和HEK293T细胞系内活化型caspase7和剪切型PARP的表达被引量：2: 2016年; 目的验证TRIM69蛋白是否能够抑制He La和HEK293T细胞系内活化型caspase7(cleaved caspase7)和剪切型PARP(cleaved PARP)的蛋白水平。方法构建含人源TRIM69的真核表达质粒,转染He La细胞和HEK293T细胞,筛选稳定表达TRIM69的细胞系,通过紫外线照射和凋亡诱导剂依托泊苷(etoposide)刺激处理,Western blot检测细胞内TRIM69蛋白、活化型caspase7和剪切型PARP蛋白水平的变化。结果紫外线照射和依托泊苷刺激后,与对照组相比,TRIM69过表达的细胞内活化型caspase7和剪切型PARP的蛋白水平均下降(P<0.05)。结论TRIM69蛋白的表达可抑制紫外线或依托泊苷刺激时He La和HEK293T细胞内凋亡相关蛋白活化型caspase7和剪切型PARP的蛋白水平。; 姚荣彦韩永卿缪时英王琳芳宋伟; 关键词：E3泛素连接酶 DNA损伤 PARP

氧化葡萄糖酸杆菌GDHK的葡萄糖培养基优化及其催化2,3-丁二醇生成乙偶姻的性能研究被引量：1: 2012年; 在前期的工作中对氧化葡萄糖酸杆菌的膜结合葡萄糖脱氢酶基因（gdh）进行了敲除,已得到一株工程菌株GDHK[1],去除了由于该酶的存在而导致葡萄糖培养基容易酸化的途径,从而促进细胞在葡萄糖上的生长。为了更有效地利用葡萄糖这一相对廉价的碳源、降低氧化葡萄糖酸杆菌的生物催化成本,首先用正交实验方法对GDHK的葡萄糖培养基优化,优化结果显示最优的葡萄糖培养基配方为：葡萄糖40 g L 1,酵母粉20 g L 1,硫酸铵0.5 g L 1,磷酸二氢钾4 g L 1,七水硫酸镁0.5 g L 1。用优化好的培养基配方测定GDHK的生长,最终菌浓从0.6 g L 1提高到0.75 g L 1,提高了25%。其次,实验还探讨了原始菌621H和敲除菌GDHK分别在葡萄糖、山梨醇、甘露醇和甘油这4种碳源培养基上培养所得的静息细胞催化2,3-丁二醇生成乙偶姻的影响。实验表明,在葡萄糖培养基上生长的GDHK得到的静息细胞催化效果最好,反应进行到12 h,乙偶姻的转化效率已达到80.00%,浓度为31.30 g L 1,是同样在葡萄糖上生长的原始菌细胞催化能力的13倍,同时也是其他培养基的1.2~1.5倍,而葡萄糖的用量也只有传统的其他碳源用量的一半,这些都说明用葡萄糖代替其他多元醇,作为工业上培养氧化葡萄糖酸杆菌催化乙偶姻生产的碳源,降低生产成本的策略具有较好的应用前景。; 张敏华韦柳静祝坤花强; 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌 2,3-丁二醇乙偶姻

Zr基块体非晶在激光点热源作用下的晶化: 2012年; 采用激光脉冲方法,每隔0.4 mm对Zr基块体非晶合金Zr53.7Ni9.4Cu28.5Al8.4进行单脉冲激光重熔实验,研究不同晶化区域的组织结构和成分变化等。结果表明,单脉冲激光重熔产生晶化主要发生在一次热影响区与二次热影响区。一次热影响晶化区晶粒为尺寸约5μm的针状晶粒和直径0.6～1.5μm的球状晶粒,晶化相为亚稳相ZrNi和稳态相Zr2Cu、Zr2Al;二次热影响晶化区晶粒为直径约5μm菊花状晶粒,晶化相为稳态相Zr2Al和Zr4Al3;晶化相中Zr原子含量百分比增加,Al、Cu的含量百分比下降,Ni基本不变。结构弛豫现象是引起热影响区的晶化的重要原因。; 黄安国于玮张虎李志远; 关键词：激光块体非晶单脉冲晶化

川陈皮素的体外抑癌活性及其机制研究被引量：22: 2011年; 目的探讨川陈皮素对Caco-2、HeLa、HepG2、A375、SW1990 5种肿瘤细胞的增殖抑制作用及对HeLa细胞的作用机制。方法 0～200μmol/L浓度的川陈皮素作用于体外培养的肿瘤细胞,应用MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪及Hochest33258染色检测细胞凋亡率及形态学变化;分光光度法检测凋亡蛋白酶caspase-3的变化。结果川陈皮素可显著抑制5种肿瘤细胞的生长,且对HeLa细胞的抑制效果最好。川陈皮素可促进HeLa细胞的凋亡,并可以增加其凋亡蛋白酶caspase-3的活性。结论川陈皮素能抑制5种肿瘤细胞尤其是HeLa细胞的生长。川陈皮素可诱导HeLa细胞发生凋亡;提高凋亡蛋白酶caspase-3的活性可能是其诱导细胞凋亡的作用机制之一。; 苏明媛牛江龙李林袁才根卢艳花; 关键词：川陈皮素人宫颈癌HELA细胞 CASPASE-3 细胞凋亡

胆管癌细胞体外三维培养模型建立与二维培养体系中生长代谢的比较被引量：1: 2011年; 背景:二维细胞培养是目前体外研究恶性肿瘤和检测抗肿瘤药物的常用方法,但存在局限性。目的:建立胆管癌细胞体外三维培养模型,比较在二维和三维培养体系中胆管癌细胞生长及代谢的差异。方法:将胆管癌细胞株QBC939培养于二维培养体系及Cytodex-3或Cytopore-2的三维培养体系中,观察细胞形态和数量,测定培养上清液中葡萄糖、乳酸浓度,计算细胞生长代谢动力学参数。结果与结论:与二维和Cytodex-3三维培养体系相比,由Cytopore-2构成的三维培养体系中细胞在微载体上贴壁率较高,分布均匀,所达到的细胞密度最高,且细胞的葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率明显低于二维和Cytodex-3三维培养系统(P<0.05)。结果证实,采用Cytodex-3或Cytopore-2微载体培养体系均可建立胆管癌细胞的三维培养模型,且Cytopore-2三维培养体系优于二维和Cytodex-3三维培养体系。; 李磊周伟佳王健东叶朝阳周燕谭文松; 关键词：胆管癌细胞微载体乳酸

氧供应量对Klebsiella pneumoniae利用混合糖生物合成2,3-丁二醇过程的影响分析: 2012年; 以筛选的肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae UV-86)为对象,考察供氧条件分别对菌体生长、葡萄糖和木糖双底物利用和产物合成的影响。研究发现生物量随氧供应量增加而增加。不同供氧条件对菌体消耗葡萄糖过程的影响较小,而代谢木糖的能力随氧供应量的增大而增强。微氧条件下2,3-丁二醇的生物合成能力最强,2,3-丁二醇产量在1.5 vvm下达到最高为30.1 g/L,是好氧时的2.5倍,最大体积产率为0.485 g/(L·h)。不同条件下两底物产物分布有所区别,木糖代谢中乙酸生产增强。因此根据不同阶段代谢特点选择适合的供氧策略可以提高过程产量和产率。; 任彤张旭朱明龙; 关键词：KLEBSIELLA PNEUMONIAE 2,3-丁二醇

人结直肠癌细胞Drosha基因敲除细胞模型的构建: 2014年; 目的为研究核酸酶Drosha与结直肠癌的关系,利用腺相关病毒(AAV)介导的染色体同源重组技术,构建Drosha基因敲除的HCT116结直肠癌细胞模型。方法设计引物通过PCR扩增Drosha基因的同源臂,构建Drosha的AAV病毒打靶载体,通过病毒的包装、感染、抗生素新霉素(G418)药物筛选、PCR以及Western blot鉴定获得基因敲除阳性细胞株,通过Cre病毒感染去除抗性基因,最终建立敲除Drosha基因的结直肠癌细胞模型。结果经过两轮打靶,分别将DNA双链上的Drosha基因去除并经Western blot鉴定,获得Drosha-/-阳性的HCT116细胞株。结论通过AAV病毒介导的染色体同源重组技术,成功构建Drosha基因敲除的HCT116细胞系。; 李芸侨李尚泽宋伟王任先张晓东王琳芳; 关键词：基因敲除同源重组结直肠癌

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化: 2011年; 利用表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nestin并具有多分化潜能,还发现NSCs与支持细胞(SCs)共培养时神经元分化比例高达60%(P<5)。研究发现细胞生长因子EGF(20 ng/mL)和bFGF(20ng/mL)能有效促使NSCs在无血清条件下增殖,并且支持细胞促进其向神经元分化。; 邓磊郭元昕庄英萍储炬郭美锦; 关键词：支持细胞 ICR小鼠诱导分化

微生物细胞脂肪酸的组成分析被引量：3: 2011年; 应用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对微生物细胞脂肪酸的组成进行了分析。结果表明,菌体的代谢状态分为两个时期:菌体生长期和油脂积累期;菌体细胞主要积累油酸(C18:1)、软脂酸(C16:0)和棕榈油酸(C16:1);通过发酵,最终得到的微生物油脂脂肪酸组成为:油酸(C18:1)64.80%、软脂酸(C16:0)19.90%、棕榈油酸(C16:1)10.94%、硬脂酸(C18:0)3.72%和亚油酸(C18:2)0.56%。GC-MS可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析,具有普遍的应用意义。; 柳志杰章辉周利花强; 关键词：微生物细胞油脂含量脂肪酸组成气相色谱-质谱联用技术

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