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浙江省自然科学基金(Y3090166)

作品数:6 被引量:19H指数:3
相关作者:姜永厚徐辉丁先锋郭瑶汪平更多>>
相关机构:浙江理工大学浙江省动物疫病预防控制中心中国计量学院更多>>
发文基金:浙江省自然科学基金浙江省科技攻关计划浙江省科技计划项目更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 5篇病毒
  • 3篇圆环病毒
  • 3篇猪圆环病毒
  • 2篇猪繁殖
  • 2篇猪细小病毒
  • 2篇猪圆环病毒2...
  • 2篇细小病毒
  • 2篇繁殖
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇原核表达
  • 1篇障碍综合征
  • 1篇植物
  • 1篇实时荧光
  • 1篇实时荧光定量
  • 1篇实时荧光定量...
  • 1篇探针
  • 1篇通用芯片

机构

  • 6篇浙江理工大学
  • 4篇浙江省动物疫...
  • 2篇中国计量学院
  • 1篇浙江大学
  • 1篇浙江农林大学

作者

  • 6篇姜永厚
  • 4篇徐辉
  • 3篇董沁芳
  • 3篇丁先锋
  • 3篇程菊会
  • 3篇汪平
  • 3篇郭瑶
  • 2篇商晗武
  • 2篇全滟平
  • 2篇吴海港
  • 2篇郭江峰
  • 1篇方立
  • 1篇赵灵燕
  • 1篇陈伟杰
  • 1篇朱良俊
  • 1篇蔡晔

传媒

  • 2篇中国预防兽医...
  • 1篇植物保护学报
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇浙江农业学报
  • 1篇浙江理工大学...

年份

  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 1篇2012
  • 2篇2011
  • 1篇2010
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
马铃薯卷叶病毒的RT-LDR-PCR检测
2011年
马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)属黄症病毒科Luteoviridae黄花病毒属Polerovirus,是目前严重影响马铃薯产量与品质的病毒,其分布局限于寄主植物的韧皮部,且含量非常低,难于提纯,这给PLRV检测带来很大的困难[1]。
汪平郭瑶程菊会董沁芳商晗武姜永厚
关键词:马铃薯卷叶病毒PCR检测马铃薯产量LEAF寄主植物PLRV
猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用
2012年
为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。
董沁芳郭瑶汪平程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚
关键词:猪细小病毒
同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立被引量:3
2011年
为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法。首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5-dCTP标记方法的灵敏度。结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记。利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6%~100%。该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台。
郭瑶汪平董沁芳程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚
关键词:通用芯片猪病毒
猪圆环病毒2型ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量:5
2014年
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,ORF4是PCV2中继ORF1,ORF2,ORF3之后的第四大开放阅读框。本研究以提取的PCV2基因组为模板经PCR扩增获得ORF4基因(386~565 nt),并克隆到pGEX-4T-1表达载体上,构建pGEX -4T-ORF4表达载体。经PCR和测序鉴定后,将重组质粒转化受体菌BL21诱导表达并进行目的蛋白GST-ORF4纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰兔,在免疫期间采血并用间接ELISA对多抗血清进行效价测定。 SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒成功表达了目的蛋白。 ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶12800以上。 Western blot分析表明ORF4融合蛋白具有很好的免疫原性,获得的抗体可以和大肠杆菌表达的GST-ORF4融合蛋白特异性反应。
王净修高章照姜永厚吴海港饶品彬全滟平徐辉
关键词:猪圆环病毒2型原核表达多克隆抗体
基于多重PCR的寡核苷酸基因芯片检测猪瘟病毒,猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒及猪圆环病毒1型和2型被引量:8
2010年
为了建立一种可同时检测区分猪瘟病毒(CSFV),猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的寡核苷酸基因芯片方法,本研究针对每种病毒设计了4条~6条寡核苷酸探针,检测低限为1.6×104PCV-2拷贝数/μL,1.6×104CSFV拷贝数/μL,1.6×105PRRSV拷贝数/μL,比琼脂糖凝胶灵敏约10倍。利用建立的寡核苷酸基因芯片方法对76个仔猪样本进行了检测,检出了3种病毒的存在,其中25个样本(32.9%)同时感染了2种以上病毒。结果表明寡核苷酸基因芯片检测是一种快速、灵敏和高效的猪只混合感染病毒的病原学诊断方法。
姜永厚商晗武徐辉朱良俊丁先锋陈伟杰赵灵燕方立
关键词:基因芯片猪瘟病毒猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒猪圆环病毒
快速实时荧光定量PCR检测猪繁殖与呼吸综合症病毒方法的建立被引量:5
2015年
为建立一种快速准确检测猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)的基于TaqMan实时荧光定量PCR方法,根据猪繁殖与呼吸综合症病毒的ORF7保守序列分别设计引物和TaqMan探针,在常规PCR的基础上,设计并优化基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测PRRSV的方法。结果表明本研究建立的基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR体系相关系数大于99%,扩增效率为97%,具有良好的线性关系。利用建立的方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒(JEV),结果均为阴性,说明此方法具有较好的特异性。灵敏度试验表明该方法检测极限为5copies/μL;应用建立的方法对58份血清样本和60份组织样本进行检测,共检测出14份阳性血清和10份阳性组织。这些结果表明本研究建立的基于TaqMan探针的PRRSV实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、灵敏度、重复性,可为临床检测PRRSV提供更高效的技术平台。
吴海港饶品彬蔡晔全滟平姜永厚
关键词:猪繁殖与呼吸综合症病毒TAQMAN探针
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