国家自然科学基金(30671400)
- 作品数：9 被引量：61H指数：5
- 相关作者：蒋细良朱昌雄黄亚丽田云龙郭萍更多>>
- 相关机构：中国农业科学院植物保护研究所中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所河北省生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 木霉菌T-DNA插入突变体库的建立及生防相关突变体的筛选
- 木霉是植物病害的重要生防真菌,可以防治灰霉病、立枯病、黄萎病等多种植物病害,在植物病害生物防治中占有极为重要的地位。迄今为止,国际上已有50多种木霉菌的不同剂型作为生物农药进行了登记,并有相当范围的大田应用。目前,木霉菌...
- 范亮波李梅冀颖刘卫德蒋细良
- 关键词：哈茨木霉突变株
- 根癌农杆菌介导的哈茨木霉菌遗传转化的研究被引量：13
- 2008年
- 利用根癌农杆菌EHA105进行了哈茨木霉Th-33的转化,在优化的转化条件下,EHA105对木霉菌的转化效率约45-100个转化子/106个孢子。利用该方法已建立了含4000多个转化子的木霉T-DNA插入突变体库。随机挑选24个转化子进行遗传稳定性分析,结果显示转化子经过5代无选择压力连续转接后都能在选择平板上正常生长;潮霉素抗性基因的PCR扩增和Southern blot分析表明,木霉转化子含有该基因,Southern blot进一步表明转化子多为单拷贝随机插入。该转化体系的改进将有利于木霉菌生防功能基因的克隆和作用机制的研究。
- 黄亚丽蒋细良田云龙郭萍朱昌雄
- 关键词：根癌农杆菌哈茨木霉T-DNA
- 农杆菌介导的哈茨木霉T-DNA转化系统优化及拮抗能力突变子的性质分析被引量：4
- 2009年
- 采用单因子试验方法研究了农杆菌EHA105介导的哈茨木霉Th-33转化过程中,各主要因素对转化效率的影响,建立了高效的转化系统,使农杆菌转化哈茨木霉的效率达到60～150个转化子/10^6个木霉孢子,利用该转化系统构建了含有8000多个转化子的T-DNA插入突变库。通过转化子与立枯丝核菌的对峙试验,从1260株转化子中筛选到23株拮抗能力发生变化的突变子。随机挑选5株突变子对其遗传稳定性进行分析,表明5株突变子都具有稳定性,聚合酶链式反应（PCR）表明上述突变子均有T-DNA片段的插入。
- 黄亚丽蒋细良田云龙叶小波郭萍朱昌雄
- 关键词：哈茨木霉农杆菌T-DNA
- 木霉菌重寄生过程中的酶学研究进展被引量：8
- 2009年
- 木霉是一种重要的生防真菌,重寄生作用是木霉的主要生防机制之一。本文对国内外在木霉重寄生过程中产生的主要酶类及其作用的研究进展进行综述。
- 叶小波曾千春蒋细良
- 关键词：木霉细胞壁降解酶
- 根癌农杆菌介导的木霉遗传转化及应用进展被引量：8
- 2010年
- 木霉作为土传植物病原菌的生防真菌,研究其功能基因具有重要的意义。根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)为木霉功能基因的研究提供了一个强有力的工具。对根癌农杆菌介导木霉遗传转化的机理、特点、方法及其在木霉中的应用进行了综述。
- 范亮波李梅冀颖刘卫德蒋细良
- 关键词：根癌农杆菌木霉菌
- 哈茨木霉突变体T-DNA插入位点侧翼序列的克隆及其插入序列分析被引量：2
- 2010年
- 利用分子生物学技术扩增T-DNA插入突变体中T-DNA侧翼未知序列是克隆突变相关基因、研究T-DNA整合方式的基础,TAIL-PCR是扩增已知序列侧翼未知序列的有效方法,本研究根据哈茨木霉的基因组特点,引用和设计了12条随机AD引物,用这些引物分别与3条右边界嵌套特异引物进行组合对哈茨木霉突变子的T-DNA侧翼未知序列进行扩增,发现不同的随机引物的扩增效率差异很大,以AD5的扩增效率最高,能扩增出80%的T-DNA插入位点的侧翼序列。随机挑取哈茨木霉T-DNA插入突变子52个,选用引物AD5对T-DNA插入位点的侧翼序列进行TAIL-PCR扩增并分析扩增序列发现,在获得的42条侧翼序列中7条只含有质粒序列、33条对应着单一的侧翼序列T-DNA、另外2条序列相同。34条T-DNA侧翼边界序列中13条保存着完整的右边界序列,21条T-DNA边界序列存在一定程度的缺失现象,说明农杆菌转化哈茨木霉的过程中T-DNA右边界存在一定程度的剪切。该研究的进行对明确农杆菌介导的木霉遗传转化过程中T-DNA的整合方式具有一定意义,为研究农杆菌转化木霉的机理奠定了实验基础。研究也精细确定了33个不同突变株的T-DNA插入位置,为后续的基因功能研究奠定基础。
- 黄亚丽蒋细良田云龙朱昌雄
- 关键词：木霉T-DNA插入突变体TAIL-PCR
- 真菌遗传转化系统的研究进展被引量：18
- 2007年
- 真菌遗传转化是功能基因研究的重要方法,就真菌遗传转化系统的最新研究进展进行了综述,主要包括真菌遗传转化的方法、各种方法的优缺点、选择标记的种类、标记基因的分离方法以及转化系统的应用等。
- 黄亚丽叶婧蒋细良朱昌雄
- 关键词：真菌功能基因组
- 木霉菌厚垣孢子形成相关基因的克隆及功能研究被引量：5
- 2007年
- 黄亚丽蒋细良朱昌雄田云龙郭萍
- 关键词：木霉菌根癌农杆菌厚垣孢子PCR检测
- 哈茨木霉厚垣孢子产生突变体的筛选及T-DNA标签序列的克隆被引量：4
- 2009年
- 利用PD液体培养基从哈茨木霉T-DNA插入突变体库中筛选出在产孢性状上与野生型菌株明显不同突变子7株,其突变表型主要表现在分生孢子产生数量显著减少和菌丝上有大量厚垣孢子分化。利用TAIL-PCR方法对7株突变体的侧翼序列进行克隆,从5个突变体中获取了5条T-DNA侧翼序列。为木霉菌厚垣孢子产生相关全长基因的克隆和产孢机制的研究奠定了基础。
- 黄亚丽蒋细良田云龙朱昌雄
- 关键词：哈茨木霉T-DNATAIL-PCR厚垣孢子
- 基因打靶与RNA干扰技术在丝状真菌基因功能组学研究中的应用被引量：2
- 2011年
- 随着丝状真菌模式生物基因组测序工作的进行,其提供的大量未知功能的基因序列,为研究丝状真菌的基因功能开辟了新的方向,并已成为生命科学领域研究的热点。对基因功能研究中最新的两种方法——基因打靶和RNAi技术的原理、技术路线和特点以及应用情况进行综述。
- 冀颖李梅蒋细良
- 关键词：功能基因组学基因打靶融合PCR
