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奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的体外培养与鉴定被引量：14: 2012年; 为体外培养纯化出稳定的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞,试验通过外科手术的方法取妊娠后期或泌乳期的荷斯坦奶牛乳腺组织,分离乳腺腺泡,用组织块法体外培养奶牛乳腺细胞,应用差时胰酶消化法和差速贴壁法将奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞分别纯化出来,并用免疫组化的方法对细胞的纯度进行鉴定。结果表明:纯化的奶牛乳腺上皮细胞多为多角形,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见,多呈鹅卵石样或铺路石样生长,并可分泌乳滴,角蛋白-18反应阳性,波形蛋白反应阴性;纯化的奶牛乳腺成纤维细胞多为长梭形,呈旋涡状或放射状生长,角蛋白-18反应阴性,波形蛋白反应阳性;经纯化后2种细胞的纯度均可达95%以上,可满足后续试验的要求。; 丁旭娜王凤龙丁玉林杨磊李瑜尹景峰赵占宽; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞成纤维细胞原代培养免疫组织化学

免疫组化法检测犬瘟热病毒在貉组织内的分布被引量：3: 2012年; 对79只确诊为犬瘟热的病貉进行CDV在组织内的定位。采用HE染色检测到包涵体出现在肺(57只貉)、脑(19只貉)、肾(58只貉)、胃(63只貉)、脾(61只貉)、淋巴结(63只貉)、扁桃体(79只貉)。采用免疫组化方法检测出上述器官之外在足垫上皮细胞(70只貉)、鼻黏膜(69只貉)、支气管(71只貉)也有强阳性表达。结果表明,采用免疫组化方法能更加准确的对CDV在犬瘟热病貉组织内分布的定位,CDV分布最广泛的器官是扁桃体。; 张文奎赵红艳龙淼郭洋王凤龙; 关键词：犬瘟热病毒包涵体免疫组化

TNF-α对体外培养奶牛乳腺上皮细胞α-SMA mRNA及蛋白表达的影响被引量：2: 2013年; 为研究重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达的影响,本研究采用组织块法体外培养和纯化出BMEC。以不同浓度(0、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL)重组人TNF-α作用BMEC,分别于不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)采用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测α-SMA mRNA相对表达量及其蛋白表达。结果显示,α-SMA mRNA相对表达量12 h TNF-α处理的各组及24 h,10 ng/mL处理组与对照组相比差异显著(p<0.05);随着TNF-α浓度的升高,α-SMA mRNA的相对表达量呈升高趋势;48 h和72 h处理组与对照组相比差异不显著。表明TNF-α对BMECα-SMA mRNA的表达有一定促进作用。然而,α-SMA的蛋白表达量却很低,只有24 h 10 ng/mL处理组检测到目的蛋白的表达。研究表明,外源性TNF-α能够促进BMECα-SMA mRNA和蛋白的表达。; 杨磊王凤龙丁玉林丁旭娜刘德明赵占宽; 关键词：肿瘤坏死因子-Α 奶牛乳腺上皮细胞 Α-平滑肌肌动蛋白

TNF-α对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞和乳腺成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达量的影响: 本研究以体外培养并纯化的奶牛乳腺成纤维细胞和奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究外源性TNF-α在奶牛乳腺纤维化过程中作用。用不同浓度(0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)的外源性TNF-α分别作用奶牛乳腺...; 杨磊王凤龙丁旭娜丁玉林王金玲赵占宽; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞 TNF-Α

TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的影响被引量：4: 2012年; 应用特异性方法检测转化生长因子(TGF-β1)对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用,用不同浓度的TGF-β1作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,在不同时间收集培养细胞及其培养液,应用MTT法检测细胞增殖、应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率法检测细胞凋亡。结果表明,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞增殖差异显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强。细胞凋亡检测显示,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞凋亡差异均显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强。TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡。; 李瑜王凤龙丁旭娜杨磊丁玉林; 关键词：转化生长因子乳腺上皮细胞增殖凋亡

含有TNF-α的奶牛乳腺炎乳汁对奶牛乳腺上皮细胞凋亡影响: 本研究探讨含有TNF-α的奶牛乳腺炎乳汁对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响.经奶牛乳腺上皮细胞体外培养后,用含有不同浓度的TNF-α的奶牛乳腺炎乳汁作用,分别于不同时间用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果表明,体外培养奶牛乳腺上...; 杨磊王凤龙; 关键词：肿瘤坏死因子奶牛上皮细胞凋亡; 文献传递

一株貉源犬瘟热病毒的分离与鉴定: 2012年; 从临床疑似犬瘟热的病貉组织中分离到1株病毒,经形态特征、血凝试验、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学鉴定,该分离病毒为犬瘟热病毒。本研究为研究犬瘟热病毒貉株分子生物学特性、致病机理及构建基因工程疫苗奠定了基础。; 张文奎韩小虎龙淼王淼郭洋王凤龙; 关键词：犬瘟热病毒

TNF-α对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞和乳腺成纤维细胞CTGF、α-SMAmRNA表达量的影响: 本研究以体外培养并纯化的奶牛乳腺成纤维细胞和奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究外源性TNF-α在奶牛乳腺纤维化过程中作用。用不同浓度(0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)的外源性TNF-a分别作用奶牛乳腺...; 杨磊王凤龙丁旭娜丁玉林王金玲赵占宽; 关键词：奶牛乳腺上皮细胞 TNF-Α CTGF A-SMA

TGF-β1对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞CTGF mRNA表达的影响被引量：2: 2012年; 为研究外源性TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞表达CTGF mRNA的影响,用组织块法体外培养和纯化出奶牛乳腺上皮细胞,并应用免疫组织化学的方法鉴定细胞的纯度。然后用不同浓度的外源性TGF-β1(0,1,5,10ng/mL)作用乳腺上皮细胞,作用12,24,48,72h后分别提取细胞的总RNA,以β-actin作为内参基因,用实时荧光定量RT-PCR方法测定CTGF mRNA相对表达量的变化,并对CTGF的PCR产物进行测序分析。结果显示,TGF-β1处理组(1,5,10ng/mL)较对照组(0ng/mL)差异显著(P<0.05);处理组CTGF mRNA的相对表达量显著升高,并呈正量效关系:随着TGF-β1浓度的升高,CTGF mRNA的相对表达量基本呈逐渐升高的趋势。测序分析结果证明扩增产物为牛的CTGF基因序列,表明外源性TGF-β1可显著促进奶牛乳腺上皮细胞CTGF mRNA的表达,进而在奶牛乳腺纤维化过程中发挥作用。; 丁旭娜王凤龙丁玉林杨磊李瑜赵占宽; 关键词：TGF-Β1 奶牛乳腺上皮细胞结缔组织生长因子

TNF-α对体外培养奶牛乳腺成纤维细胞α-SMA mRNA及蛋白表达的影响被引量：6: 2013年; 肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factorα,TNF-α）主要来源于活化的巨噬细胞、肥大细胞和T细胞等,参与炎症反应和免疫调节过程,并能够刺激成纤维细胞的增殖过程。TNF-α通过与细胞的肿瘤坏死因子受体（tumor necrosis factor receptor,TNFR）结合发挥作用,TNFR一般分为TNFR1（CD120a）和TNFR2（CD120b）两型。TNFR1分布于多种正常细胞或肿瘤细胞表面,TNFR1被认为是TNF-α的主要受体。; 杨磊王凤龙丁玉林丁旭娜赵占宽; 关键词：平滑肌肌动蛋白 BLOT

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