国家自然科学基金(30960277)
- 作品数：15 被引量：25H指数：3
- 相关作者：李莲瑞贺艳艳潘辉左文斌徐宏伟更多>>
- 相关机构：塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 新疆多浪羊白细胞介素8 cDNA的克隆测序及其变异SNP的分析被引量：1
- 2011年
- 采集多浪羊的血液,分离白细胞,提取总RNA,用白细胞介素8(IL-8)的引物进行两步法的RT-PCR扩增、克隆与酶切鉴定,测序后进行序列比对,与NM_001009401.1同源性高达99%,初步判定为多浪羊的IL-8编码全长cDNA。通过序列比对,发现多浪羊IL-8的基因起始密码子上游第七个碱基发生突变,在NM_001009401.1中是T,而在测序的多浪羊的IL-8中是C。对该测序序列进行数据库搜索和序列比对,发现该碱基变异很独特,并对该变异可能对mRNA蛋白翻译的影响进行了初步的分析。
- 杨威华左文斌潘辉贺艳艳刘书东徐丽君王娟娟李莲瑞
- 关键词：多浪羊白细胞介素8SNPMRNA二级结构
- MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响被引量：3
- 2013年
- 通过MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响,确定棉酚对多浪羊淋巴细胞产生影响的最短作用时间和最低浓度,用于指导生产实践。从新疆多浪羊外周血分离淋巴细胞,将其加入10 mL的RPMI-1640中,均匀加入96孔细胞培养板中,于CO2培养箱中37℃培养12 h后,分别以不同浓度(5、10、15、20、25、30、35μmol/L)的棉酚进行作用,作用时间分别为1、2、3、4、5、6 h,加入MTT培养4 h,加入DMSO溶液终止反应,用酶联免疫检测仪于490 nm处检测各孔的吸光值。结果表明,随着棉酚作用浓度及作用时间的递增,多浪羊淋巴细胞活性在逐渐下降,说明棉酚对多浪羊的淋巴细胞活性有明显的抑制作用。
- 王娟娟贾山岭万新军李莲瑞
- 关键词：MTT棉酚淋巴细胞
- 多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2013年
- 【目的】进行多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析,为多浪羊IL-1β的功能研究及多浪羊免疫应答基因的筛选奠定基础。【方法】根据GenBank中NM_001009465.2的mRNA序列设计引物,以新疆多浪羊淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR扩增多浪羊IL-1β基因序列。【结果】IL-1β基因序列包含了一个862 bp的开放阅读框,成熟蛋白编码的氨基酸序列长度为286个氨基酸。通过IL-1-β核苷酸多序列比对发现,第70、163、180、269位上四个相对保守的碱基处出现了四个突变;通过IL-1-β氨基酸多序列比对,第24、36位上两个氨基酸发生突变。通过GenBank中的Blastn序列比较分析,多浪羊的IL-1β基因与普通绵羊的同源性高达99%。【结论】在进化树体系中,多浪羊与反刍动物集成一束,它们与其它哺乳动物源于共同的祖先,但分别处于进化树上不同的分支。
- 曾国航曹玉华王娟娟潘伊微贾山玲徐宏伟李莲瑞
- 关键词：多浪羊IL-1Β基因克隆核苷酸序列分析
- 新疆多浪羊IL-1β基因地高辛探针的标记和敏感性检测
- 2015年
- 【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-1β相关的新基因奠定基础。【方法】将构建好的多浪羊的p MD-18T-IL-1β质粒[1]进行PCR扩增,经过切胶回收,目的基因的浓缩后,采用罗氏地高辛标记和检测试剂盒标记IL-1β基因,获得IL-1β地高辛探针,进行敏感性检测,在Hybond N+膜上显影,计算探针浓度。【结果】计算出标记后的探针浓度为17.1 g/m L。【结论】通过southern杂交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的双链DNA,标准杂交液中为DIG标记的IL-1β基因单链DNA,通过避光显色,在Hybond N+膜有深紫色的杂交条带,证明探针的浓度达到标准浓度。
- 曾国航徐宏伟潘伊微贾山岭曹玉华李莲瑞
- 关键词：地高辛
- 棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡的影响被引量：2
- 2011年
- 通过棉酚对多浪羊淋巴细胞的研究,探索棉酚体积分数对淋巴细胞的影响.主要用细胞培养、瑞氏-吉姆萨染色、DNA电泳等方法观察棉酚对多浪羊淋巴细胞的凋亡效应.结果表明:当细胞培养液中棉酚体积分数为0.071mol/L,培养淋巴细胞8h后,可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖,并且促进其凋亡.
- 刘书东左文斌贺艳艳潘辉徐丽君顾海洋杨威华李莲瑞
- 关键词：棉酚多浪羊淋巴细胞凋亡
- 新疆多浪羊pcDNA3.1-IL-1β表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 为了构建新疆多浪羊真核表达载体pc DNA3.1-IL-1β,试验采用重组质粒p MD-18TIL-1βPCR和质粒pc DNA3.1双酶切的方法,获得目的基因白细胞介素-1β(IL-1β)和载体片段pc DNA3.1(+),通过连接、转化宿主菌大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,再通过菌液PCR和双酶切来验证阳性克隆,并测序。结果表明:试验已成功构建真核表达载体pc DNA3.1-IL-1β,完成了pc DNA3.1-IL-1β的菌液PCR和酶切鉴定。通过对IL-1β功能的了解,以及熟悉质粒提取和质粒连接的方法,完成重组质粒pc DNA3.1-IL-1β的构建。
- 张晶宋显明李玮艾东旭李莲瑞
- 关键词：真核表达载体酶切鉴定白细胞介素-1多浪羊
- 棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡及其对核酸降解的研究被引量：2
- 2012年
- 主要通过使用RPMI 1640培养基培养淋巴细胞、瑞氏—吉姆萨染色、DNA和RNA电泳等方法来研究棉酚对多浪羊淋巴细胞的凋亡效应和对淋巴细胞核酸影响。研究结果表明,经瑞氏—吉姆萨染色4 h淋巴细胞出现凋亡小体;DNA和RNA通过琼脂糖凝胶电泳检测在4 h分别出现梯状条带和18S降解。可见,当细胞培养液中棉酚浓度为1.35μmol/L,培养淋巴细胞4 h后,可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖,并且促进凋亡及其核酸的降解。
- 刘书东左文斌贺艳艳潘辉徐丽君顾海洋杨威华李莲瑞
- 关键词：棉酚多浪羊淋巴细胞核酸凋亡
- 一株β-溶血菌的鉴定被引量：2
- 2015年
- 旨在通过细菌16SrRNA鉴定分离得到的一株β-溶血细菌(B1)。提取菌株B1的基因组DNA,利用细菌16SrRNA的通用引物扩增B1菌株的16SrRNA,测序并对序列进行比对分析。结果成功扩增出B1菌株的16SrRNA,条带很亮且无杂带,阴性对照无条带,条带大小为1 499bp,符合16SrRNA 1 500bp的要求;利用NCBI数据库的Blast工具进行核酸比对,结果显示B1菌株与Aneurinibacillus migulanus菌的16S rRNA序列的一致性在99%以上,通过进化树分析可知,B1与Aneurinibacillus migulanus strain A72,Aneurinibacillus migulanus strain ATCC 9999这2种菌株的亲缘关系最近,可以确定B1菌株为短芽孢菌属的Aneurinibacillus migulanus。
- 徐宏伟李慧张丽娜李莲瑞
- 关键词：细菌鉴定RRNA
- 新疆卡拉库尔羊Fas基因的克隆及核苷酸序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了分析新疆卡拉库尔羊的Fas基因,根据普通绵羊的碱基序列和相关文献设计引物,用RT-PCR扩增并测定了卡拉库尔羊Fas基因的cDNA序列。结果表明,Fas基因cDNA序列包含了一个750 bp的开放阅读框,通过GenBank中的Blastn序列比较分析,卡拉库尔羊的Fas基因与普通绵羊的同源性高达99.69%。这为将来制备卡拉库尔羊Fas基因探针及卡拉库尔羊分子免疫学的发展提供了理论依据。
- 潘辉贺艳艳李莲瑞
- 关键词：FAS基因核苷酸序列分析
- 多浪羊IFN-γ基因克隆及核苷酸序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了分析新疆多浪羊的IFN-γ基因,根据GenBank中NM_001009803的mRNA序列设计引物,以新疆多浪羊淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR扩增多浪羊IFN-γ基因序列。测序结果表明I,FN-γ基因序列包含了一个582 bp的开放阅读框,通过GenBank中的Blastn序列比较分析,多浪羊的IFN-γ基因与普通绵羊的同源性高达99.82%,为多浪羊IFN-γ的功能研究及多浪羊免疫应答基因的筛选奠定基础。
- 左文斌潘辉李莲瑞
- 关键词：多浪羊IFN-Γ基因克隆核苷酸序列分析
