重庆市重大科技专项(2004-27)
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 相关作者：邱宗荫王伟佳温冬梅张秀明王前更多>>
- 相关机构：重庆医科大学南方医科大学中山市人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 甾醇类新药NSC67657诱导THP-1细胞分化及ICAT蛋白在细胞分化中的作用研究
- 2010年
- 目的 研究新的甲磺酸甾醇类药物NSC67657对白血病细胞的诱导分化作用及可能机制.方法 采用MTT法分析在不同浓度NSC67657作用下THP-1细胞的增殖水平,通过细胞表面分化抗原的检测,观察不同药物浓度、不同作用时间处理的THP-1细胞分化程度,并对完全分化细胞做形态学分析.通过RT-PCR和Western blot方法观察药物作用细胞前后β-catenin相关蛋白1（ICAT）基因和蛋白的表达情况;构建pDsRed-ICAT真核表达载体,测序后转染THP-1细胞,筛选阳性克隆,并做表达验证.采用流式细胞术,瑞特染色和超微结构观察,分析重组质粒转染细胞在药物处理前和处理24 h后THP-1细胞的分化情况.结果 通过比较可见药物处理后的THP-1细胞增殖明显受抑;细胞表面分化抗原CD14的表达水平随药物处理时间的延长和药物浓度的升高而增加,结合增殖分析,以10 μmol/L药物、连续诱导5 d为宜,细胞分化可达到90%以上.形态学观察验证了THP-1细胞在NSC67657的作用下向单核系分化.真核表达载体构建成功,电转后THP-1细胞ICAT基因和蛋白表达升高.药物作用前后,重组质粒转染THP-1细胞CD14的表达与对照组比较无明显差异;通过瑞特染色和超微结构观察,发现药物作用重组质粒转染THP-1细胞24 h后,细胞仍处初级分化阶段.结论 NSC67657可诱导THP-1细胞向单核系分化,并激活ICAT基因的表达,但仅是该基因的高表达并不 足以诱导THP-1细胞分化,也不会增加THP-1细胞对NSC67657 药物作用的敏感性.
- 王伟佳张秀明温冬梅
- 关键词：甾醇类THP-1细胞
- 茅莓提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨茅莓提取物(RP)对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2 h再灌注24 h模型,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓提取物5,10 g.kg-1ig对神经细胞凋亡数目及其相关蛋白Bc l-2,Bax表达的变化。结果:茅莓提取物5,10 g.kg-1显著抑制神经细胞凋亡,增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bc l-2/Bax的表达比例增加。结论:茅莓提取物抗凋亡机制可能与增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bc l-2/Bax有关。
- 王继生李惠芝邱宗荫夏永鹏任凌燕
- 关键词：细胞凋亡BEL-2BCL-2/BAX
- HL-60细胞向单核系和粒系分化的比较蛋白质组学研究被引量：4
- 2009年
- 背景与目的:已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化。本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白。方法:分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原(CD11b/CD14)的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证。改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点,基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对蛋白点进行分析,RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证。结果:全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化。在2μmol/L ATRA和10μmol/L NSC67657作用5d后,CD11b和CD14的表达均在90%以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论。蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后,有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异。有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异;ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证,发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异。结论:双向电泳/MOLDI-TOF MS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析,发现了一批与两系分化有关的蛋白分子,为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示。
- 王伟佳唐薇邱宗荫
- 关键词：白血病HL-60细胞细胞分化蛋白质组学
- 急性早幼粒白血病HL60细胞电转染条件的优化被引量：4
- 2010年
- 目的:比较不同电转染条件下,真核表达载体转染HL60细胞的效率,筛选得到针对HL60细胞最佳的电转染条件。方法:采用pDsRED-C1真核表达载体,分别在2mm和4mm电转杯中依照不同电转条件对HL60细胞进行转染,根据存活细胞所占比例确定电转参数;在转染48h后,比较不同质粒加入量及二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)加入电转体系前后的细胞转染阳性率。调整G418筛选浓度,在选定转染条件下进行HL60细胞电转,采用流式细胞技术,细胞化学染色及超微结构观察,分析电转前后HL60细胞的生物学性状。应用相同条件再转染eYFP-C1质粒于HL60细胞,G418筛选后观察荧光表达情况。结果:HL60细胞在2mm和4mm电转杯中的死亡数量随电击强度和脉冲次数的增加而升高,且方形波较回旋波有更强的击穿细胞膜的能力;固定电转参数下,2mm和4mm电转杯中的HL60细胞电转阳性细胞数随加入质粒量的增加呈先升高后下降的趋势,且在相同质粒加入量,2mm电转杯比4mm电转杯有更高的转染效率;在相同电转参数和相同电转杯中,预冷条件下加入DMSO电转时阳性率比不加入DMSO进行电转的阳性率高近13倍;400μg/mlG418是最佳筛选浓度;选定最佳电转条件进行电转,通过筛选,没有发现细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达,细胞形态原始,未见凋亡现象发生。相同条件电转eYFP-C1空载质粒于HL60细胞仍然可以获得很好的转染效果。结论:HL60细胞电转染条件的改良,可以有效提高HL60细胞的电转阳性率,为后续细胞真核表达载体的转染及基因功能研究奠定基础。
- 王伟佳张秀明王前温冬梅邱宗荫
- 关键词：转染电穿孔HL60细胞
