目的 建立一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,并初步探讨其对乳腺癌诊断的应用价值.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.用茎环引物将miR-16（作为miR-21内参基因）与miR-21分别逆转录成相应cDNA.再用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR对cDNA进行扩增、检测.然后,通过信噪比（signal to noise ratio,SNR）分析试验的准确性；通过熔解曲线评价试验的特异性；通过标准曲线的R2评估试验的精确性；通过批内和批间差异计算试验的稳定性.另外,用自建方法检测33例乳腺癌患者、18例乳腺良性疾病和49名健康人群血清miR-21和miR-16水平,并根据乳腺癌组与健康对照组中miR-21相对表达量确定临界值,以评价其对乳腺癌诊断的敏感度、特异度.结果 通过PCR退火与延伸在温度和时间上的优化,本试验所建立方法SNR≥99.36％；熔解曲线为单峰；标准曲线R3=0.994 8；批内CV＜ 1.5％,批间CV＜ 4％.以miR-16为内参,用自建SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳腺癌组、良性疾病组与健康对照组血清miR-21的相对表达量分别为20.83±18.18、20.86±10.11和9.33±4.44,经Kruskal Wallis检验,3组间表达量差异有统计学意义（x2=16.92,P＜0.001）,且健康对照组与乳腺癌组、健康对照组与良性疾病组间的差异均有统计学意义（Z值分别为-2.58、-4.42,P均≤0.01）,而乳腺癌组与良性疾病组血清miR-21表达量差异无统计学意义（Z=-0.51,P=0.608）.以miR-21相对表达量18.32为临界值,其对乳腺癌诊断的敏感度为51.5％（17/33）,特异度为93.9％（46/49）.结论 建立了一种较敏感、特异、稳定的SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,该方法对乳腺癌的诊断可能有一定价值.
