国家重大基础研究前期研究专项(2002CCC00700)
- 作品数：7 被引量：44H指数：4
- 相关作者：田卫东刘磊李志勇陈希哲谢家敏更多>>
- 相关机构：四川大学暨南大学附属第二医院浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家重大基础研究前期研究专项高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类牙乳头细胞的体外培养及细胞生物学性状研究被引量：3
- 2005年
- 目的体外分离培养人类牙乳头细胞,并对传代细胞的生物学特性进行研究。方法选择3～4月胎龄的自然流产人胚胎,分离牙乳头,组织块法培养人类牙乳头细胞并鉴定。观察细胞的生长特性,经Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白免疫细胞化学染色及细胞矿化诱导后的钙盐染色对细胞的生物学性状进行研究。结果分离培养的人类牙乳头细胞在体外生长良好,细胞及分泌基质中的Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白表达阳性。将培养细胞行矿化诱导后,细胞可形成钙化基质。结论通过机械分离及贴壁法可获得人类牙乳头细胞,其传代细胞在基质形成和矿化能力方面与体内人牙乳头细胞有相似性,有潜力作为牙组织工程的种子细胞。
- 谢家敏田卫东汤炜陈希哲郑晓辉王涛
- 关键词：牙乳头细胞细胞培养矿化
- 颅神经嵴干细胞的体外培养及其多向分化潜能研究被引量：7
- 2004年
- 目的 分离培养颅神经嵴干细胞 ,探讨其体外生物学特征 ,为进一步研究其牙、颌向分化提供细胞来源。方法 取小鼠胚胎颅段神经管 ,组织块法无血清条件培养获颅神经嵴干细胞 ,形态学、BurdU掺入及免疫细胞化学法鉴定其生物学性状。结果 原代培养的颅神经嵴干细胞为梭形成纤维样细胞 ,表现为克隆样生长、自我更新能力和多向分化能力等干细胞性状 ,且特异性标记物HNK_1呈阳性表达。结论 本研究成功地获取保持有多潜能干细胞性状的颅神经嵴细胞 ,为深入研究其牙、颌向分化奠定基础。
- 田卫东江宏兵刘磊汤炜李晓东
- 关键词：干细胞生物学特征分化
- 小鼠牙胚的鸡胚培养模型的建立被引量：7
- 2004年
- 目的 采用鸡胚建立一种新的小鼠牙胚体内培养模型。方法 取 15d龄的昆明胎鼠下颌第一磨牙牙胚 ,将其用钨丝固定于孵化 4～ 5d(翼芽期 )的鸡胚内 ,继续孵化 10d后 ,终止培养并取材 ,进行苏木精 -伊红染色 ,常规组织学观察。结果 小鼠牙胚在鸡胚内可继续生长发育 ,从帽状期进入到钟状末期 ,镜下可见分化成熟的成牙本质细胞、成釉细胞和分泌的基质。结论 以翼芽期鸡胚作为小鼠牙胚体内培养的宿主 ,可以保持其发育 ,再现牙齿形成过程中的细胞分化、形态发生的生理过程。
- 闫征斌田卫东刘磊侯景秋陈希哲李志勇
- 关键词：小鼠牙胚鸡胚
- 第一鳃弓外胚间充质细胞体外培养模型的构建
- 目的分离培养小鼠第一鳃弓外胚间充质细胞。方法显微解剖E9.5胎鼠第一鳃弓,采用组织块法和酶消化法对其进行原代培养,通过细胞形态观察、细胞生长曲线描记、计算细胞倍增时间和特异性标记物检测对其细胞生物学特性进行研究。结果组织...
- 闫征斌刘磊田卫东林云锋李志勇
- 关键词：分化发育
- 文献传递
- 第一鳃弓外胚间充质细胞定向内皮细胞分化的实验研究
- 目的研究第一鳃弓外胚间充质细胞自我更新能力,探讨体外诱导分化成为内皮细胞的可能性。方法端粒酶原位杂交和BrdU 渗入验检测外胚间充质细胞的增殖能力,取第3代细胞,培养于含有20%FBS、10ng/mlVEGF、1ng/m...
- 闫征斌刘磊田卫东林云锋李志勇
- 关键词：分化内皮细胞
- 文献传递
- 第一鳃弓外胚间充质细胞定向脂肪细胞分化的实验研究
- 目的研究第一鳃弓外胚间充质细胞自我更新能力,探讨体外诱导分化成为脂肪细胞的可能性。方法端粒酶原位杂交和BrdU 渗入实验检测外胚间充质细胞的增殖能力,取第3代细胞,培养于含有10 mg/L 胰岛素、1μmol/L 地塞米...
- 闫征斌刘磊田卫东林云峰李志勇
- 关键词：分化脂肪细胞
- 文献传递
- 胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖和分化的影响被引量：2
- 2010年
- 背景：研究表明,胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对细胞的增殖分化有重要作用,但对人类牙乳头间充质细胞生物学特性有何影响尚不清楚。目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人类牙乳头间充质细胞增殖和分化能力的影响。方法：在建立人类牙乳头间充质细胞培养模型的基础上,①分别用含体积分数为1%或10%胎牛血清的DMEM/F12培养基将两种生长因子配制成不同的实验终浓度,取第4代生长良好的人类牙乳头间充质细胞,分别加入含0,0.1,1,10,100μg/L碱性成纤维细胞生长因子和0,25,50,75,100μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ的培养基（0μg/L作对照）,培养96h后四甲基偶氮唑盐法测增殖活性。②设10μg/L碱性成纤维细胞生长因子组、100μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ组、碱性成纤维细胞生长因子＋胰岛素样生长因子Ⅰ组和对照组。同上述方法每孔分别加含相应质量浓度生长因子的培养液,分别在培养1,3,5,7d后,四甲基偶氮唑盐法测细胞增殖活性,改良酶动力学法测定细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论：在0~100μg/L质量浓度范围时,两种生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖具有促进作用,碱性成纤维细胞生长因子的促增殖作用比胰岛素样生长因子Ⅰ大,联合作用时有协同促增殖作用。碱性成纤维细胞生长因子的最大有效质量浓度为10μg/L,胰岛素样生长因子Ⅰ的最大作用质量浓度为100μg/L。在0~7d时,碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞的碱性磷酸酶活性影响不明显,随时间的增加,胰岛素样生长因子Ⅰ对细胞碱性磷酸酶活性影响增加,与碱性成纤维细胞生长因子联用时,对增加碱性磷酸酶的活性有协同作用。
- 谢家敏田卫东刘磊
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子增殖分化碱性磷酸酶
- 第一鳃弓外胚间充质细胞定向成骨细胞分化的实验研究
- 目的研究第一鳃弓外胚间充质细胞自我更新能力,探讨体外诱导分化成为成骨细胞的可能性。方法端粒酶原位杂交和BrdU 渗入实验检测外胚间充质细胞的增殖能力,取第3代细胞,培养于含有10mol/L 地塞米松、10mmol/L β...
- 闫征斌刘磊田卫东林云锋李志勇
- 关键词：分化成骨细胞
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：18
- 2005年
- 目的 体外研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因转染骨髓间充质干细胞 (MSCs)的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法 体外分离培养大鼠MSCs,用重组GFP的腺病毒载体Ad GFP及脂质体介导质粒pEGFP C1两种方法转染GFP,流式细胞术观察比较基因转染和表达结果;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果 重组Ad GFP对细胞的感染率达(41 3±1 4)%,感染 6周后仍有表达;脂质体组转染效率最高为 12 5%。病毒感染组阳性细胞与未感染组细胞经成骨诱导分化后碱性磷酸酶表达均逐渐增高;诱导 3周后茜素红钙盐染色均为阳性。结论 重组GFP的腺病毒载体Ad GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖分化能力与未转染细胞差异无统计学意义(P>0 05),可以作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法。
- 李志勇刘磊田卫东陈希哲阎征斌林云锋
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞
- 骨髓间质干细胞转染牙本质涎磷蛋白基因的实验研究被引量：6
- 2006年
- 目的评价牙本质涎磷蛋白(DSPP)转基因修饰骨髓间质干细胞(BM-MSC)后,对BM- MSC生物学特性及DSPP表达的影响。方法构建含小鼠DSPP基因的真核表达载体pcDNA3．1 (+)／DSPP,用脂质体介导转染大鼠BM-MSC;RT-PCR检测转染后细胞的Pax-9和DMP-1基因表达情况;检测转染细胞矿化诱导后Von Kossa钙盐染色计算单位面积钙结节形成率。结果成功构建DSPP真核表达载体pcDNA3．1(+)／DSPP,酶切后得到3．0 kb和5．4 kb的片段,与回收的目的基因和载体基因片段大小相符;经转染BM-MSC后24 h可见DSPP基因表达,48 h后可见有Pax-9基因表达,无DMP-1基因表达;转基因后的BM-MSC免疫组化染色显示DSPP阳性;转染细胞矿化诱导后钙结节形成率高于未转染细胞。结论BM-MSC转基因表达DSPP能够增强其矿化能力,并诱导牙齿发育相关基因的表达,提示DSPP可能在牙齿发育早期具有一定作用。
- 李志勇刘磊陈玲林云峰田卫东
- 关键词：磷蛋白类干细胞间质细胞
