国家自然科学基金(39770233)
- 作品数：10 被引量：66H指数：7
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- 相关机构：中南大学湘雅三医院湖南农业大学悉尼大学Westmead医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 改良的新生猪胰岛细胞体外培养被引量：8
- 2001年
- 介绍一种通过细胞分离及体外培养获得大量新生猪胰岛细胞团的方法。新生猪胰腺经 0 .5～ 1mg .ml- 1的V型胶原酶消化 8～ 1 2min ,再经体外培养 7d ,可获大量纯化的胰岛细胞团。同时 ,新生猪胰岛内的B细胞不仅胰岛素分泌功能良好 ,而且其超微结构正常。提示新生猪胰岛细胞可作为异种移植治疗 1型糖尿病重要的供体来源。
- 罗贤明祝和成叶斌王维
- 关键词：胰岛细胞胰岛素体外培养乳猪
- 经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞治疗糖尿病的实验研究被引量：17
- 2002年
- 目的 :探讨经肝动脉移植微囊化新生猪胰岛细胞后 ,移植物生理功能以及副反应的特点。方法 :化学药物诱导制作犬的糖尿病模型后 ,将分离、纯化及微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内 ,测定移植前后糖尿病犬的胰岛素用量、血糖水平以及葡萄糖刺激血清C肽、肝功能及CD4 /CD8的变化 ,并于移植 6月后对移植受体肝、胰进行病理学检查。结果 :移植后模型犬血糖逐步下降至正常水平 ,胰岛素用量减少 ,移植 6月后 2犬停用胰岛素 ,并维持血糖正常达 180d之久 ;移植后肝检查无明显变化 ,胰腺检查见凋亡胰岛无再生现象。结论 :微囊化的新生猪胰岛细胞经肝动脉移植入糖尿病犬的肝内 ,能纠正异种动物犬糖尿病模型的高血糖状态 。
- 叶斌王维刘晟朱仁勇
- 关键词：异种移植微囊化胰岛细胞肝动脉糖尿病动物疾病模型
- 异种移植候选供体宁乡猪内源性逆转录病毒调查
- 目的 对异种移植候选供体宁乡猪携带的内源性逆转录病毒进行调查分析,为评价从猪到人异种移植中的生物安全性提供依据.方法 从宁乡猪保种群中随机采集22头个体的血样标本,应用PCR技术分别对这些个体基因组中猪内源性逆转录病(p...
- 邢晓为易受南董琼叶斌童琼娟叶征王维
- 新生猪胰岛移植治疗糖尿病病人的临床研究(英文)被引量：8
- 2011年
- 目的:评估新生猪胰岛移植治疗1型糖尿病方法的安全性和有效性。方法:所有22例病人均接受经肝动脉新生猪胰岛移植治疗,移植后病人接受多种免疫抑制治疗方案;第1组14例病人使用环孢菌素、骁息和甲基强的松龙,没有接受猪C肽检测;第2组2例病人只使用环孢菌素和骁息,第3组6例病人的免疫抑制方案是OKT3、他克莫司、西罗莫司和甲基强的松龙。在移植治疗前和移植后1年,病人进行了血糖、外源性胰岛素用量、糖化血红蛋白、猪内源性反转录病毒(PERV)和肝功能的评估,第2组和第3组的8例病人接受了血清猪C肽检测。6例病人在移植后4～6年进行了复查。结果:第1组14例病人移植后胰岛素用量减少和HbA1c水平降低。第2组2例病人在移植后代谢指标没有变化,猪C肽检测阴性。第3组的6例病人在移植3个月以后,胰岛素用量均减少,HbA1c正常,6例病人血清均检测到有意义的猪C肽。其中2例病人接受了第2次新生猪胰岛移植,1例病人短暂脱离胰岛素治疗7 d。所有病人在移植后均未出现严重不良反应,没有PERV感染的证据。6例病人在新生猪胰岛移植4～6年后接受检查,此6例病人均在接受移植治疗1年后停止免疫抑制治疗,复查时6例病人均接受胰岛素治疗。其中4例病人严格限制糖的摄入,2例病人为自由饮食;这2例病人中,有1例出现2次酮症,有轻度糖尿病视网膜病变;1例出现1次由于急性胃肠炎导致的酮症;其余4例均未出现任何并发症。6例病人再次接受PERV检测均为阴性。结论:异种胰岛可以在人体内存活并发挥其功能,没有发现严重不良反应。
- 王维莫朝辉叶斌胡平安刘晟易受南
- 关键词：新生猪胰岛异种移植糖尿病病人
- 异种移植微囊化新生猪胰岛细胞受体感染PERV潜在风险分析被引量：4
- 2007年
- 目的:研究新生猪胰岛细胞(neonatal pig islets,NPIs)经微囊化后异种移植到狗体内,受体感染猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的风险。方法:将10只狗随机分成实验组和对照组,分别移植微囊化猪胰岛细胞和未被微囊化猪胰岛细胞。应用放射免疫的方法检测狗体内血清特异性猪C-肽以判断胰岛移植物活性;采用免疫组织化学技术检测28d后肝移植部位是否有微囊化猪胰岛细胞;PCR和RT-PCR技术分别检测不同时间点狗外周血中PERV及猪mt DNA。结果:移植微囊化猪胰岛细胞2周后,给受体注射葡萄糖,15～30min狗的外周血中猪C-肽表达明显升高,而对照组检测不到猪C-肽;免疫组化结果表明,狗肝脏移植部位周围可检测到少量微囊化猪胰岛细胞,肝组织无明显异常;PCR和RT-PCR结果表明,移植微囊化猪胰岛细胞在不同时间点狗外周血内均未检测到猪mt DNA及PERV表达,而对照组于移植后4d内检测到猪mt DNA及PERV呈微弱表达,10d后均未见表达。结论:微囊化猪胰岛细胞能够在受体肝脏内存活并发挥作用,受体内不存在PERV的感染,提示海藻酸钠微囊可以有效地防止猪mt DNA及PERV的穿越,可能在异种移植中具有较好的应用前景。
- 叶征邢晓为童琼娟容鹏飞王维
- 关键词：异种猪内源性逆转录病毒微囊化胰岛
- 湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的检测及亚型分析被引量：4
- 2005年
- 为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头个体中,93.5%的个体基因组中同时有PERV的A,B 2种亚型(记为env-AB),另外6.5%的个体基因组中则同时有PERV的A,B,C 3种亚型(记为env-ABC),所有个体的耳样组织中均未检测到单独存在的PERV的A,B或C亚型.说明湖南沙子岭猪中存在PERV序列,且能以mRNA的形式表达,病毒亚型以env-AB为主.
- 黎淑娟邢晓为薛立群黄生强袁洪王维
- 关键词：异种移植猪内源性逆转录病毒病毒亚型
- 药物诱导狗I型糖尿病的研究被引量：12
- 2000年
- 通过四氧嘧啶 链脲霉素联合给药 ,探讨其对狗I型糖尿病动物模型的成模效率以及对实验动物的毒副作用。用药 7～ 1 4d后 5/ 6只雄性狗的血糖持续维持在高血糖状态 ,平均达 (2 2 .7± 3.2 )mmol·L- 1 ,胰岛素用量从 2U·d- 1 增至 (2 1 .4± 2 .4)U·d- 1 。 3只雌性动物在用药后 7d内死亡。结果提示 ,四氧嘧啶 链脲霉素联合用药可减少二者单用时的剂量 ,从而降低毒副作用 ;这种联合用药是建立I型糖尿病模型较好的化学诱导方法 ,具有成模率高等特点 。
- 刘晟王维罗贤明叶斌
- 关键词：药物协同作用联合给药疾病模型
- 糖尿病犬经肝动脉肝内移植微囊化猪胰岛细胞的安全性和有效性被引量：3
- 2006年
- 目的评估移植于I型糖尿病犬肝脏中的微囊化新生猪胰岛细胞(NPI)的生物相容性、免疫学特性及生理学特性。方法I型糖尿病犬分为A、B两组,每组15只,A组每只犬分别经肝动脉灌注微囊化新生猪胰岛细胞40～60万个,B组每只犬分别经肝动脉灌注未微囊化新生猪胰岛细胞40～60万个,两组动物移植后均不使用免疫抑制治疗。移植前后分别测量移植受体的肝脏功能及淋巴细胞CD4+/CD8+比值。移植6个月后所有移植受体的肝脏均进行病理学检查。结果移植后A组外源性胰岛素用量从移植前的22 u逐渐降至5 u,B组所需外源性胰岛素从移植前的24 u下降至10 u。移植后2～3周B组胰岛素用量恢复到移植前的水平,而A组的部分动物的胰岛素剂量继续减至8 u。B组受体移植后血的CD4+较移植前升高,而A组的CD4+和CD8+细胞移植后无明显变化。移植后所有受体的肝功能及组织结构未见异常。结论微囊化的新生猪胰岛细胞在受体犬的肝脏中有很好的生物相容性。微囊可以延长移植物的存活,且异种移植微囊化的新生猪胰岛细胞能够纠正糖尿病犬的高血糖状态。
- 叶斌王维刘晟
- 关键词：微囊化胰岛异种移植肝动脉
- 湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的研究被引量：12
- 2006年
- 为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。多组织RT-PCR检测3头沙子岭猪肾、心、肝、肺、脾等组织中PERV的表达情况,了解其在各组织中的分布情况;最后,扩增、测序该猪种的env基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。PCR和RT-PCR结果表明,所检测的31头沙子岭猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERV mRNA表达,其中有2头个体携带env-A、env-B、env-C3种囊膜蛋白基因,而其余的29头个体只带有env-Ae、nv-B两种囊膜蛋白基因,未检测到env-C基因。多组织RT-PCR扩增结果表明,3头沙子岭猪的肾、心、肝、肺、脾等组织中,pol、gage、nv-A、env-B基因均有表达,未检测到env-C基因表达。测序沙子岭猪的env基因,结果发现,沙子岭猪env-B和env-C基因与其他猪种序列比较分别存在2和10个碱基的差异,而env-A基因序列没有差异,说明不同的猪种之间env基因存在多态性。以上结果表明,沙子岭猪种群携带PERV,其亚型主要以PERV-A,B为主;PERV在该猪种肾、心、肝、肺、脾等多种组织中的分布没有明显组织特异性,且93.5%(29/31)个体表现为env-C基因缺失,提示沙子岭猪作为候选猪种可能在异种移植中具有较好的应用前景。
- 邢晓为薛立群黄生强黎淑娟王维
- 关键词：猪内源性逆转录病毒沙子岭猪异种移植
- 湖南沙子岭猪SLA-DR基因克隆及生物信息学分析被引量：9
- 2007年
- 为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,分析SLA基因特性和抗原多态性,评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY中相关软件进行生物信息学分析。得到的湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因特异性基因片段,大小分别为1 177 bp和909 bp。生物信息学分析发现,所扩增的SLA-DRA和SLA-DRB基因片段均包含完整的开放阅读框,分别编码252和266个氨基酸残基。将湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因在GenBank登录,登录号分别为EF143987和EF143988。同源性分析发现,湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB与人类相应的DRA、DRB相比,核苷酸序列同源性分别为83%和83%,编码氨基酸同源性分别为83%和79%。与GenBank登录的其他猪种相比,SLA-DRA基因同源性最高可达100%,而SLA-DRB基因具有多态性。
- 唐医亚邢晓为薛立群黄生强王维
- 关键词：沙子岭猪基因克隆异种移植
