贵州省优秀科技教育人才省长资金项目([2010]04)
- 作品数：6 被引量：36H指数：3
- 相关作者：罗军敏袁建波徐林秦欢于伟娜更多>>
- 相关机构：遵义医学院贵州大学贵阳医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省科学技术基金国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 热休克蛋白16.3多克隆抗体的制备
- 2014年
- 目的大肠杆菌表达Hsp16.3,制备其多克隆抗体。方法设计引物,从H37Rv基因组中扩增出目的片段Hsp16.3,pET28a-Hsp16.3质粒的构建、克隆和表达。对His-Hsp16.3进行诱导、表达和纯化。用纯化好的蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,用ELISA检测抗血清中多抗的效价,用Western blot法检测多克隆抗体的生物活性。结果重组质粒pET28aHsp16.3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示在His-Hsp16.3的相对分子质量(Mr)约为20 000。制备的多克隆抗体效价为1∶800,且特异性较好。结论成功的克隆、表达、纯化出His-Hsp16.3,并且成功制备了抗Hsp16.3多克隆抗体。
- 高绍莹秦欢徐林秦娜琳于伟娜丁陈波袁建波宋丹罗军敏
- 关键词：抗体基因表达结核分枝杆菌
- PRDX2基因沉默促进结直肠癌细胞上皮-间质转化增强侵袭转移能力被引量：7
- 2015年
- 目的探讨Peroxiredoxin 2(PRDX2)基因沉默在结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其参与侵袭转移的可能机制。方法将带有抗性的对照shRNA(shRNA-Control)和PRDX2 shRNA(shRNA-PRDX2)慢病毒颗粒分别转染结直肠癌SW480细胞,转染后细胞分为PRDX2沉默组(shRNA-PRDX2)和空载对照组(shRNA-Control)。采用免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测两组细胞中PRDX2蛋白和mRNA表达;以5 ng/m L的TGF-β1作用两组细胞,在0、48、72 h观察两组细胞形态学变化;划痕实验和Transwell小室分别检测两组细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot和qRT-PCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达。结果与对照组相比,PRDX2沉默组细胞PRDX2蛋白和mRNA的表达显著降低(P<0.05),成功建立PRDX2基因沉默稳定细胞株;经TGF-β1作用后,PRDX2沉默组细胞呈纺锤体样间质细胞表型,且迁移和侵袭能力明显增强;E-cadherin蛋白及mRNA水平表达显著下降,Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P<0.05)。结论 PRDX2基因沉默可促进结直肠癌SW480细胞发生EMT,从而增强细胞的侵袭和转移能力,可能与其转录调节Snail、Twist1表达有关。
- 于伟娜冯继红丁陈波高绍莹徐林袁建波罗军敏
- 关键词：PEROXIREDOXIN基因沉默结直肠癌上皮-间质转化
- 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16．3蛋白的原核表达及功能检测被引量：9
- 2014年
- 目的进行结核分枝杆菌小分子热休克蛋白MTB Hsp16.3原核表达载体的构建、表达、纯化并初步观察其生物学效应。方法提取临床H37Rv分离株基因组DNA,PCR扩增Hsp16.3基因,将其重组到原核表达载体Pet28a中,构建原核表达载体Pet28a-Hsp16.3,进行双酶切及测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE检测,同时通过镍柱纯化试剂盒纯化Hsp16.3,测定纯化后蛋白浓度,并进行Western blot法检测。将不同浓度纯化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞IL-10和IFN-γ的表达,同时设定空白对照组及阳性对照组。结果成功构建重组质粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21(DE3)中获得成功表达,通过镍柱纯化系统得到纯化Hsp16.3融合蛋白。qRT-PCR检测结果显示,不同浓度纯化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,可促进IFN-γ的产生而抑制IL-10的产生。结论成功克隆、表达和纯化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-γ,抑制IL-10的产生。
- 秦欢高绍莹袁建波徐林罗军敏
- 关键词：蛋白纯化巨噬细胞
- 结核性胸膜炎患者外周血及胸腔积液中CD4^+和CD8^+ T细胞的活化分析被引量：2
- 2013年
- 结核性胸膜炎的发病机制目前仍不清楚。研究表明,免疫缺陷是结核性胸膜炎的重要发病因素。本研究主要通过检测结核性胸膜炎患者外周血和胸腔积液中CD4+和CD8+T细胞的比例变化及其活化程度,分析并探讨结核性胸膜炎患者机体免疫状况。在筛选病例后收集患者的外周血和胸腔积液,分离出单核细胞,采用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的比例以及人白细胞抗原DR(HLA-DR)表面活化标记和颗粒酶B在CD8+T细胞中的表达水平。结果显示,结核性胸膜炎患者外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞的比例均低于健康对照组。患者胸腔积液中CD3+和CD4+T细胞的比例均显著高于外周血,而CD8+T细胞无显著差异。患者外周血中CD4+HLA+和CD8+HLA+T细胞显著高于健康对照组,而CD8+颗粒酶B+T细胞显著低于健康对照组。患者胸腔积液中CD4+HLA+、CD8+HLA+和CD8+颗粒酶B+T细胞均显著低于外周血,仅外周血中CD8+T细胞比例与颗粒酶B水平呈正相关。以上结果表明,结核性胸膜炎患者外周血与胸腔积液中的免疫应答存在差异,提示患者可能存在免疫缺陷。
- 朱杰华罗军敏叶军秦欢江娟邵云浩
- 关键词：结核性胸膜炎CD8+T细胞颗粒酶B
- 三聚氰胺分子印迹预组装体系紫外光谱研究被引量：17
- 2011年
- 通过对三聚氰胺(MEL)与甲基丙烯酸(MAA)、丙烯酰胺(AM)和亚甲基丁二酸(IA)3种单体在甲醇中相互作用的分子印迹预组装体系的紫外光谱研究发现,MEL与3种单体之间均产生了氢键相互作用;其中,AM对体系影响最大,MAA次之,IA最弱。氢键使MEL的三嗪环共轭双键和发色团取代的芳核产生π—π*电子跃迁,使各组装体系最大吸收波长红移。实验推测出MEL与3种单体形成最佳模板-单体复合物的浓度比分别为:cMEL:cMAA=1:6、cMEL:cAM=1:8、cMEL:cIA=1:8。差示紫外光谱表明:3个预组装体系中1个MEL分子分别与2个MAA分子、3个AM分子、1个IA分子各自形成MEL-2MAA、MEL-3AM和MEL-IA型复合物。
- 张孝刚朱秋劲胡萍
- 关键词：三聚氰胺分子印迹紫外光谱分子识别
- 苗医复合疗法治疗冷骨风的技术规范被引量：1
- 2022年
- 目的:规范苗医复合疗法的相关技术操作流程,为苗医药临床诊疗技术的推广应用提供参考依据。方法:通过收集临床资料,结合苗医“两纲五经”“毒乱”理论及相关临床案例全面阐述苗医复合疗法的疗效、概念、适应症、禁忌证、技术操作规范、不良反应情况及处理。结果:患者经规范化的苗医复合疗法治疗后,症状明显改善。结论:苗医复合疗法是将隔药纸火灸疗法与弩药针疗法相结合,既达到温通散寒的作用,又达到了攻毒排毒的作用,对冷骨风的疗效显著,值得临床推广。
- 肖淦辰陈星宇熊芳丽
- 关键词：苗医药复合疗法
