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B16F10-ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗抑制小鼠黑色素瘤肺转移的效应与机制初探被引量：2: 2014年; 目的探讨B16F10—ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗抑制小鼠黑色素瘤肺转移的效应和机制。方法将12只C57BL／6小鼠，分为瘤苗免疫组（给予B16F10-ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗免疫）和对照组（未给予瘤苗免疫）。B16F10—ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗免疫小鼠后，经尾静脉注射B16F10细胞，观察肺转移情况；采用细胞毒实验分析瘤苗免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性；酶联免疫吸附试验检测免疫小鼠的血清γ-干扰素（IFN-γ）水平；逆转录聚合酶链反应方法检测瘤组织中转化生长因子β2（TGF-β2）、锌指增强子结合蛋白1（ZEB1）、丝裂原活化蛋白激酶4和β-肌动蛋白的表达；免疫荧光检测瘤组织中E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达。结果瘤苗免疫鼠肺部肿瘤的结节数明显少于对照组。对照组和瘤苗免疫组小鼠肺脏重量分别为（406．3±27．12）mg和（285．8±19．01）mg，差异有统计学意义（P=0．0054）。瘤苗免疫组小鼠CD8^＋T细胞对靶细胞的杀伤率[（42．62±3．465）％]明显高于对照组[（22．29±1．804）％]，差异有统计学意义（P=0．0032）。瘤苗免疫组和对照组小鼠血清中IFN-γ水平分别为（55．200±7．173）pg／ml和（6．435±1．339）Pg／ml，差异有统计学竞义（P=0．0003）。免疫鼠瘤组织TGF-β2、ZEB1、N-钙黏蛋白表达水平下降，而E-钙黏蛋白表达水平上升。结论B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫能抑制小鼠黑色素瘤肺转移，这与CD8^＋T细胞为主的细胞免疫应答有关，与瘤苗诱导高水平IFN-γ影响肿瘤组织上皮间质转换有关。; 何向锋施文赵枫姝王建红徐小红谭清和孙永强陈登宇窦骏; 关键词：黑色素瘤癌症疫苗小鼠

5-FU和奥沙利铂对结肠癌细胞自噬与外泌体释放的影响及其机制探讨被引量：1: 2023年; 目的:探究5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和奥沙利铂对小鼠结肠腺癌CT26.WT细胞自噬与外泌体释放的影响及两者之间的关联机制。方法:通过蛋白印迹试验(Western blot)检测经正常培养、5-FU、奥沙利铂和饥饿培养处理CT26.WT细胞后自噬相关蛋白以及胞吐调节蛋白Syntaxin的表达情况,利用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)检测CT26.WT细胞内多泡体与自噬小体的相对位置关系以及多泡体与溶酶体的相对位置关系。利用超速离心法提取定量培养各组细胞的培养上清液中的外泌体,用Western blot检测与多泡体的形成和外泌体的释放有关的Syntaxin及外泌体标志蛋白表达情况。结果:5-FU、奥沙利铂和饥饿处理CT26.WT细胞均可诱导细胞自噬的发生,CLSM下可分别观察到部分多泡体同自噬小体,部分多泡体同溶酶体发生位置重合。CT26.WT细胞经饥饿培养后,Syntaxin蛋白较正常对照组表达下调,经5-FU或奥沙利铂处理后,Syntaxin蛋白同正常对照组相比表达无明显变化。5-FU和奥沙利铂处理组的外泌体EGFP-CD63蛋白表达较正常对照组明显下降。结论:5-FU和奥沙利铂不影响CT26.WT细胞内多泡体的形成,但均可诱导CT26.WT细胞发生自噬,并促进多泡体经自噬溶酶体途径降解,从而下调外泌体的释放。; 施文何向锋陈锦鹏孙永强周志强蔡明邱建; 关键词：5-氟尿嘧啶奥沙利铂结肠腺癌细胞自噬外泌体

CFSE荧光负染法检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞摄取超顺磁性氧化铁纳米粒子: 2015年; 目的:探讨CFSE荧光负染法用于检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吞噬超顺磁性氧化铁纳米粒子(super paramaganetic iron oxide nanoparticles,SPIO)的可行性及其荧光特征。方法:体外对RAW264.7细胞进行SPIO的标记,然后分别采用普鲁士蓝染色方法和CFSE荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取情况;用台盼蓝染色法检测CFSE荧光负染细胞的活力;应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取。结果:普鲁士蓝将RAW264.7细胞内吞噬的SPIO标记为醒目的蓝色,核固红将细胞核标记为红色,在荧光图像上表现为荧光负染区,呈筛孔状。CFSE荧光负染法与普鲁士蓝染色法的检测结果具有很好的对应性。RAW264.7细胞经过SPIO和CFSE双重标记后,对细胞活力的影响较小,死细胞比例较低。结论:CFSE荧光负染法可用于RAW264.7活细胞吞噬SPIO的检测,同普鲁士蓝染色法具有很好的对应性,两者的检测结果可相互印证。; 何向锋杨俐萍陈宝安王建红文颂施文徐薇薇凌国杰; 关键词：单核巨噬细胞白血病细胞

小鼠盲肠系膜三角原位种植结肠癌模型的构建与评价: 2015年; 目的：探讨经盲肠系膜三角注射肿瘤细胞悬液制备小鼠结肠癌原位种植模型的可行性。方法手术暴露小鼠盲肠，将小鼠结肠腺癌CT26． WT细胞接种于盲肠系膜三角，建立小鼠结肠癌原位种植模型。结果20只BAL B／c小鼠经盲肠系膜三角注射肿瘤细胞悬液制备小鼠结肠癌原位种植模型的成瘤率为100％，且不易发生梗阻，但可发生肝、脾、横膈、肠系膜淋巴结等多处转移。结论经盲肠系膜三角注射肿瘤细胞悬液制备小鼠结肠癌原位种植模型手术时间短，不易损伤结肠壁，对小鼠的创伤小，手术风险小；手术操作简单，易于掌握。; 何向锋施文文颂孙永强凌国杰沈康彭春雷陈宝安王建红; 关键词：结肠肿瘤小鼠模型

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江苏省博士后科研资助计划项目(1301099C)

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