国家中医药管理局基金资助项目(02-03JP43)
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
- 相关作者：李俊赵晓山罗仁李玉萍聂晓莉更多>>
- 相关机构：广州中医药大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家中医药管理局基金资助项目广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢性肾炎肾阴虚证cDNA消减文库的构建被引量：8
- 2006年
- 目的:采用抑制性消减杂交(SSH)技术构建汉族人慢性肾炎(CGN)肾阴虚证cDNA消减文库。方法:选择汉族人CGN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建CGN肾阴虚证消减文库。结果:用SSH方法筛选出了CGN肾阴虚证的差异cDNA片段,得到了386个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了CGN肾阴虚证的cDNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建CGN肾阴虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆CGN肾阴虚证相关基因奠定了基础。
- 李玉萍罗仁赵晓山李俊聂晓莉
- 关键词：慢性肾炎肾阴虚证抑制性消减杂交
