高等学校科技创新工程重大项目(705031)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：张军程通夏宁邵许辰煜张涛更多>>
- 相关机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项高等学校科技创新工程重大项目教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种可药物筛选及体内检测的新型慢病毒基因治疗载体的构建被引量：1
- 2008年
- 为实现基因治疗过程中的有效药物筛选及体内检测,首次利用核糖体内部进入位点(IRES)构建了同时携带O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(MGMT)的突变型P140K基因和荧光素酶(Luciferase)基因的慢病毒载体pBobi-MIL。RT-PCR、免疫荧光、药物筛选克隆形成及化学发光检测等实验结果表明感染重组慢病毒L-MIL的细胞能同时表达MGMT及Luciferase。构建成功的新型慢病毒载体为今后的基因治疗奠定了基础,也为慢病毒滴度的确定提供了一种新的可能。
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- 关键词：基因治疗慢病毒载体MGMTLUCIFERASE
- 应用离心方法提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导实验效率被引量：4
- 2007年
- 重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体已获得了日益广泛的应用。为进一步提高转导实验的效率,本研究利用已构建的带有CMV启动子-增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达盒的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1细胞中探索了应用离心方法提高转导实验效率的可行性。结果显示离心方法可显著提高单位时间内重组杆状病毒对哺乳动物细胞的转导效率,同时不会对靶细胞造成损伤。通过对离心时间、离心后孵育时间、病毒上清的稀释缓冲液的进一步摸索优化,结果显示病毒上清以PBS为稀释缓冲环境室温600g水平离心1h即可获得高水平的转导效率,优于在PBS环境中27℃孵育8h的效果。该方法可在获得高转导效率的同时显著缩短实验时间,具有快捷、高效、低损伤的特点,可作为一种常规操作方法用于日常实验。本研究进一步应用该方法对多种不同来源和类型的哺乳动物细胞株进行基因转导,结果显示该方法可适用于多数不同种属和组织来源的哺乳动物细胞,其中对贴壁细胞的效果最为显著。
- 程通杨炳春许辰煜张涛杜海莲王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞转导离心
