北京市科委科技计划项目(H060920050630)
- 作品数：3 被引量：29H指数：3
- 相关作者：张莉袁玫彭江卢世璧侯克东更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科委科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导的实验研究被引量：11
- 2007年
- 目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）向软骨诱导分化的特性。方法去除新鲜人脐带动、静脉和外膜组织，获得Wharton胶并剪碎，胶原酶消化法进行原代培养。经传代培养、流式细胞检测表面标志、克隆形成率测定后，用软骨诱导培养液使MSCs向软骨细胞分化，并以组织化学和免疫组织化学染色进行鉴定。逆转录聚合酶链反应（reverse transcription—polymerase chain reaction，RT-PCR）检测软骨特征性标志。结果人脐带Wharton胶富含干细胞。采用酶消化法可快速分离培养原代细胞。流式细胞检测表明这些细胞不表达造血干细胞标志，表达CD44、CDl05、CD27l等间质干细胞表面标志；HLA-ABC阳性表达，HLA—DPDQDR阴性表达。不同代MSCs的克隆形成率差异无统计学意义（P〉O．05）。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志，经软骨诱导分化后，组织化学和免疫组织化学检测表明其能够较好地表达软骨细胞标志。RT—PCR结果显示人脐带Wharton胶中MSCs诱导前后均表达Sox-9、Col-2Al。结论人脐带Wharton胶中MSCs来源广泛，无伦理学限制；且具有前软骨细胞的特性，有望成为软骨组织工程新型的种子细胞。
- 侯克东许文静张莉袁玫孙明学彭江赵斌眭翔郭全义卢世璧
- 关键词：脐带间质干细胞软骨
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建被引量：5
- 2010年
- 背景:构建组织工程软骨的方法多为自体种子细胞复合天然或合成物支架,目前多存在种子细胞来源有限、支架安全性和生物相容性、以及细胞在支架中分布不均的问题。目的:探讨人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导分化并体外构建无支架组织工程软骨的可行性。方法:分离培养人脐带Wharton胶中的间充质干细胞,进行流式细胞学鉴定。对软骨诱导前后的细胞进行组织学和免疫组织化学染色,对其表达的葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原进行定量研究,并应用RT-PCR检测软骨诱导前后Ⅱ型胶原和Sox-9mRNA的表达。采用密集诱导培养→离心管培养→生物反应器培养,进行体外构建无支架软骨组织。结果与结论:人脐带Wharton胶富含干细胞,流式细胞仪检测结果显示这些细胞不表达造血干细胞标志,表达CD44,CD105、CD271等间充质干细胞表面标志;HLA-ABC阳性表达,HLA-DPDQDR阴性表达。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志,诱导后葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原显著增高。RT-PCR结果显示人脐带Wharton胶间充质干细胞诱导前后均表达Sox-9、Ⅱ型胶原mRNA。说明人脐带Wharton胶间充质干细胞具有前软骨细胞的特性。采用密集诱导培养结合生物反应器培养,不用支架,体外可以构建成大块组织工程软骨。表明人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种良好的构建组织工程软骨的种子细胞。
- 侯克东袁玫张莉郭全义彭江眭翔赵斌刘舒云卢世璧
- 关键词：脐带软骨组织工程软骨
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞的分离、培养与鉴定被引量：16
- 2008年
- 目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细胞生长动力学研究,流式细胞仪分析细胞表面分子特点,组织化学和免疫组化染色鉴定软骨特征性标志物表达情况。RT-PCR检测Sox-9及Col-2A1mRNA表达情况。结果采用酶消化法可以快速分离Wharton胶中MSCs,且细胞迅速贴壁生长;组织块法培养获得种子细胞时间较长。流式细胞仪检测显示所获得的细胞表达CD44、CD105等MSCs标志物,HLA-ABC表达阳性,HLA-DPDQDR表达阴性。经过冻存复苏后免疫表型无显著变化。组织化学和免疫组化染色显示脐带Wharton胶MSCs弱表达软骨特征性标志。RT-PCR显示Wharton胶MSCs表达Sox-9和Col-2A1。结论人脐带Wharton胶MSCs不向造血系分化,且具有前软骨细胞的特性,有望作为软骨组织工程新型的种子细胞。
- 侯克东卢世璧张莉袁玫孙明学彭江赵斌眭翔许文静
- 关键词：脐带间质干细胞细胞培养
