江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(02-2)
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 相关作者：李学忠白龙梅刘春风杨亚萍周媛更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种高纯度多巴胺神经元原代培养方法的建立被引量：3
- 2008年
- 目的:通过胚胎中脑祖细胞(MPC)体外培养获得高纯度的多巴胺神经元培养体系。方法:取自E12鼠胚中脑腹侧的MPC悬液在添加bFGF的DMEM/F12/N2/L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)培养液中扩增培养,5d后停用bFGF,促进细胞分化,4d后通过Neurobasal/阿糖胞苷(Ara-c)抑制胶质细胞生长,获得纯神经元,使用TH鉴定细胞,计数细胞比例和纯度,β-tubulinIII鉴定成熟神经元,并计数细胞比例和纯度。结果:在添加了bFGF20μg/L的DMEM/F12/N2/AA-2P培养液中MPC增殖良好,体外培养7d后细胞数量扩增到培养前的(16·54±1·25)倍;使用Neu-robasal/阿糖胞苷后胶质细胞受抑制,神经元占94%以上,其中多巴胺(DA)能神经元的比例约(35·56±4·13)%。结论:E12鼠胚MPC原代培养合并使用阿糖胞苷是获取高纯度DA能神经元培养体系的可靠途径。
- 白龙梅李学忠张志琳刘春风
- 关键词：多巴胺能神经元细胞培养
- 脂多糖刺激的星形胶质细胞可能通过IL-6介导PC12细胞增殖双重性被引量：4
- 2008年
- 目的:研究脂多糖(LPS)刺激的星形胶质细胞(AC)条件培养液(ACM)对PC12细胞生长的影响及其可能的因子。方法:在原代培养的AC中加入不同浓度的LPS作用24h,收集条件培养液,观察ACM对PC12细胞生长的影响,分析AC分泌的细胞因子的变化,研究IL-6中和抗体后处理的ACM对PC12细胞生长的影响。结果:ACM可促进PC12细胞的增殖,0.1mg·mL-1LPS刺激组作用最强。LPS可促进AC分泌IL-6,并呈剂量依赖性。IL-6中和抗体可阻断这种效应。结论:AC对PC12的生长具有双重性,IL-6可能是关键的因素之一。
- 李学忠白龙梅杨亚萍周媛刘春风
- 关键词：脂多糖星形胶质细胞PC12双重性IL-6
- 星形胶质细胞在脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用被引量：3
- 2008年
- 目的探讨星形胶质细胞在不同浓度脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用。方法在第3代星形胶质细胞中加入终浓度为0、0．1、10．0mg／L脂多糖作用24h，收集条件培养液。采用L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐和人成纤维生长因子促进孕12d的SD大鼠中脑前体细胞扩增、分化为多巴胺能神经元，通过阿糖胞苷抑制胶质细胞的增殖，建立高比例多巴胺能神经元的纯神经元培养体系。在此基础上，利用Transwell双室培养系统建立星形胶质细胞和纯神经元共培养体系，观察脂多糖、条件培养液和星形胶质细胞对纯神经元体系中多巴胺能神经元存活及酪氨酸羟化酶mRNA表达的影响。结果脂多糖对纯神经元体系中的多巴胺能神经元有损伤作用，并呈剂量依赖性。与单用脂多糖比较，条件培养液显著升高多巴胺能神经元存活，其中0．1mg／L脂多糖刺激组多巴胺能神经元的存活能力最强，其次为10．0mg／L组，最后为0mg／L组。与条件培养液组比较，共培养体系中多巴胺能神经元存活能力更高，其中0．1mg／L脂多糖干预后多巴胺能神经元的存活能力最强，随后依次为10．0mg／L、0mg／L、20．0mg／L脂多糖。多巴胺能神经元表达酪氨酸羟化酶mRNA的变化类似多巴胺能神经元数量的变化。结论脂多糖对多巴胺能神经元有损伤作用，并呈剂量依赖性，适度激活的星形胶质细胞对多巴胺能神经元有保护作用，过度激活则削弱了这种保护作用。
- 李学忠白龙梅杨亚萍周媛刘康永刘春风
- 关键词：脂多糖类多巴胺神经元星形胶质细胞
- 栀子甙在炎症诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用及机制被引量：1
- 2008年
- 目的研究栀子甙在脂多糖（LPS）介导的星形胶质细胞（AC）过度激活时对多巴胺能神经元保护作用的影响及可能机制。方法建立高纯度多巴胺能神经元培养体系、多巴胺能神经元和AC混合培养体系并分别经栀子甙预处理后再予以LPS作用24h，同时设立对照组，观察多巴胺能神经元的生存率，TH mRNA的表达及培养基中TNF-α、NO、IL-6、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和胶质源性神经生长因子（GDNF）含量的变化。结果AC促进多巴胺能神经元的存活。栀子甙不能增加高纯度多巴胺能神经元培养体系中多巴胺能神经元的存活率，却可剂量依赖地增加混合培养体系中多巴胺能神经元存活率，同对照组相比，40mg／L组增加细胞存活率从203．0％±17．4％升高到256．7％±15、2％（F=17．22，P=0．001）。LPS作用24h后混合培养体系中TNF-α、NO、GDNF含量并无显著变化，IL-6、MMP-9含量显著上升，栀子甙可明显下调这种反应，同对照组相比，40mg／L组IL-6含量下降到原来的67．2％±6．4％（F=12．89，P=0．001），MMP-9下降到原来的77．3％±9．8％（F=8．27，P=0．001）。结论LPS通过过度激活AC而增加炎性因子的分泌，从而削弱其对多巴胺能神经元的保护作用，栀子甙通过抑制AC分泌炎性介质，不增加GDNF的分泌，上调AC对多巴胺能神经元的保护作用。
- 白龙梅李学忠杨亚萍周媛刘春风
- 关键词：环烯醚萜类神经保护药细胞因子类神经元星形细胞
