感染个体进行 HIV 抗体的检测对 HIV 的诊断和控制至关重要,传统的血液检测法对医院的环境设施及相关医务人员水平的要求较高,也存在交叉感染的危险。研究表明, HIV 感染者的唾液或口腔黏膜渗出液中几乎不含 HIV 病毒,但含有抗 HIV 抗体,并且检出率高。这一发现为艾滋病检测提供了一个全新的发展方向[1-2]。在以口腔分泌物为样本的 HIV 抗体诊断试剂研发领域,虽然国内外曾有报道,但国内至今可成熟应用到临床检测的试剂非常少见。本研究通过工艺摸索及优化,建立了一种基于口腔黏膜渗出液样本检测 HIV1/2型抗体的诊断方法(免疫分析法),为临床提供了适用于 HIV 抗体检测的安全、无创、快速诊断试剂。研制的检测试剂可广泛用于高危人群的流行病学调查和监测,对推进社区医疗和家庭 POCT(point of care testing)在传染病诊断领域的发展具有重要意义。
金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SpA)和链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)是细菌产生的特异结合宿主抗体的细菌免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin(Ig)-binding proteins,IBPs)的代表分子。SpA和SpG均包含由多个序列高度同源的结合结构域重复组成的抗体结合区,各单结构域都具有完全的结合IgG的功能。为研究这些单结构域随机组合能否产生具有新结合特性的组合分子,将SpA的A、B、C、D、E以及SpG的B2、B3共7个单结合结构域随机组合构建成噬菌体展示文库后,应用人IgG1、2、3、4为诱饵分子对该文库进行4轮筛选,获得了SpA天然分子中不存在的单结构域排列组合分子D-C。在筛选过程中,阴性对照噬菌体的逐渐减少、展示两个结构域以上的噬菌体比例不断增多,尤其是D-C组合的选择性富集和其随机连接肽的严格筛选都显示了筛选的有效性和D-C组合的重要性。噬菌体ELISA进一步证实D-C与人IgG四亚类的结合能力远强于天然SpA分子。该研究应用分子进化技术首次获得了一种与人IgG四亚类具有结合优势的新型组合分子D-C,不仅可为IgG纯化、制备、检测等方面的应用提供新的候选分子,还为细菌IBP结构功能的进一步研究提供新的手段。