国家自然科学基金(30471307)
- 作品数：10 被引量：65H指数：4
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- 相关机构：河南农业大学郑州市动物园更多>>
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- 鸡福氏志贺菌SHV-12型ESBLs基因的扩增、原核表达及酶特性研究被引量：1
- 2009年
- 对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果表明:构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带。重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性。SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度37℃、诱导时间5 h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13μmol;它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%。
- 孙亚伟胡功政陈红英刘建华苑丽邓立新袁业友
- 关键词：福氏志贺菌原核表达酶特性
- 鸡志贺氏菌β-内酰胺酶的测定及其与耐药质粒的关系被引量：3
- 2006年
- 通过对鸡志贺氏菌β-内酰胺酶及ESBLs的测定、质粒提取、细菌转化及质粒结合转移等试验,分析其耐药性与其质粒之间的关系,探讨耐药质粒在细菌间的传递方式.结果表明,质粒转化后的转化子对β-内酰胺类抗生素全部耐药,对氨基糖苷类、氟诺酮类有一定程度的敏感;而质粒接合传递体的耐药谱与质粒转化子一致.耐药菌株的质粒可编码β-内酰胺酶,且耐药质粒可通过结合转移方式传递至感受态大肠杆菌.
- 梁军匡秀华苑丽胡功政杨玉荣司红彬
- 关键词：志贺氏菌超广谱Β-内酰胺酶耐药质粒质粒转化
- 鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子进化被引量：10
- 2008年
- 【目的】检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制。【方法】对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SHV、CTX-M3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型。【结果】5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309(TEM-116)序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418(SHV-12)序列完全相同,为SHV-12型。头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β-内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs。【结论】临床分离鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-1V型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1V型ESBLs是由TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来。
- 胡功政孙亚伟陈红英司红彬苑丽邓立新莫娟李胜利
- 关键词：福氏志贺氏菌ESBLS基因型
- 鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的基因分型
- 【研究目的】对5株临床分离产ESBLs的鸡福氏志贺氏菌及1株头孢噻呋诱导产ESBLs的标准福氏志贺氏菌进行基因型鉴定,研究鸡福氏志贺氏菌ESBLs的分了进化机制。【方法】对标准福氏志贺氏菌用0.5MIC的头孢噻呋诱导,每...
- 胡功政孙亚伟陈红英司红彬苑丽邓立新莫娟李胜利
- 关键词：福氏志贺氏菌ESBLS基因型
- 文献传递
- 禽致病菌ESBLs和AmpC酶的检测及药敏分析被引量：8
- 2007年
- 用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了禽分离致病菌,分别进行了β-内酰胺酶(BLA)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌及产AmpC菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的20株致病菌有大肠埃希菌15株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株、肺炎克雷伯菌1株及鹑鸡肠球菌1株,其中法氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌及鹑鸡肠球菌系兽医上首次检出。报道所分离的20株致病菌均产β-内酰胺酶,其中产ESBLs 9株,同时产ESBLs和AmpC酶1株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素/抑制剂联用能降低药物对细菌的MICs。
- 付秀玲吴华陈红英苑丽潘玉善武博达胡功政
- 关键词：AMPC酶
- 鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V基因的重组表达及酶特性被引量：1
- 2009年
- 通过PCR扩增获得鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V型ESBLs基因片段,定向克隆入质粒载体构建重组质粒,酶切和DNA测序鉴定后转化受体菌BL21,用SDS-PAGE电泳观察目的基因在重组菌中的表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶作用。结果表明,构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带;DNA测序发现插入片段与SHV-12和TEM-1V ESBLs基因序列完全一致。重组质粒转化BL21所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性。重组菌S-BL21、T-BL21的最优表达条件分别是IPTG浓度0.5、0.8mmol/L,诱导温度37℃、37℃,诱导时间5、4h。SHV-12和TEM-1V型ESBLs能水解青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、头孢曲松和头孢噻肟;对头孢噻呋钠的Km值最小,分别为4.9和1.29;对头孢曲松钠的Km值最大,分别为53.43和24.13;抑制剂舒巴坦钠、它唑巴坦钠对SHV-12和TEM-1V型ESBLs水解抗生素有不同程度的抑制作用。
- 孙亚伟胡功政陈红英邓立新刘建华潘玉善许兰菊李胜利
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶
- 鸭里默氏杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测及药物敏感性研究被引量：3
- 2008年
- 对临床分离的鸭里默氏杆菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测及药物敏感性研究。按照CLSI提供的ESBLs表型筛选及确认方法,药敏试验采取K-B纸片法。结果临床分离的鸭里默氏杆菌中有1株产ESBLs,阳性检出率为6.25%;临床分离鸭里默氏杆菌非产酶菌株对常用第三代头孢类抗生素及半合成青霉素类药物的敏感率均高于86.7%,耐药率低于13.3%,产酶菌株对15种β-内酰胺类药物的7种呈现耐药,有1种呈现中介。产酶和非产酶菌株对氨基糖苷类4种药物均不敏感,敏感率低于26.7%;对环丙沙星、恩诺沙星则完全不敏感,而耐药率高于80%,对加替沙星、左旋氧氟沙星、司帕沙星呈现中度敏感。对氟苯尼考、多西环素、米诺环素敏感率高于86.7%,对磷霉素的敏感率仅为6.7%。
- 吴华石科王同亮胡功政陈华
- 关键词：超广谱
- 志贺氏菌对第三代头孢菌素的耐药机制初步研究被引量：3
- 2006年
- 通过对福氏志贺氏菌的诱导及其诱导耐药菌MIC与β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,探讨福氏志贺氏菌对三代头孢菌素的耐药机制。结果表明,随诱导代数的增加,诱导菌对抗菌药的MIC值亦逐步增大,诱导至30代时,三代头孢对诱导菌的抗菌活性显著降低,MIC范围为2μg/mL￣32μg/mL。当对福氏志贺氏菌诱导5代时,已有β-内酰胺酶的产生;诱导至15代时,已有ESBLs产生。诱导至30代时,ESBLs已大量产生。志贺氏菌对三代头孢菌素的主要耐药机制为超广谱β-内酰胺酶的产生。
- 梁军胡功政苑丽司红彬杨玉荣匡秀华
- 关键词：志贺氏菌头孢菌素耐药机制Β-内酰胺酶超广谱Β-内酰胺酶
- 鸡志贺菌产ESBLs的基因型鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的检测鸡志贺菌所产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,分析其产酶耐药的分子机制。方法采用双纸片协同增效法对临床分离的鸡志贺菌进行了ESBLs检测,用试管二倍稀释法测定了其对常用抗菌药物的敏感性,并通过PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定该菌所产ESBLs的基因亚型。结果鸡志贺菌为ESBLs产生菌,对三代头孢类药物严重耐药,具有多重耐药特性。该菌所产ESBLs的基因序列与U48775对比,同源性为99.2%,属于TEM型ESBLs;与同源性最高的AY903309(TEM-116)相比,同源性为99.8%,两处碱基发生变化,409位碱基T突变为C,没有引起氨基酸变化,为沉默突变,157位碱基A突变为G,引起53位丝氨酸变为甘氨酸且该突变是新的突变位点。结论该菌产ESBLs基因型为新的基因亚型,暂命名为TEM-1V,上传至GenBank获序列号DQ211973。
- 胡功政司红彬陈红英邓立新许兰菊苑丽魏战勇邓强
- 关键词：志贺氏菌ESBLS基因型MIC
- 猪鸡致病菌β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测与药敏试验被引量：43
- 2005年
- 对分离的猪鸡致病菌,分别进行了?-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测,并用试管二倍稀释法测定了β-内酰胺环类抗生素或β-内酰胺环类抗生素与抑制剂舒巴坦联用对非产酶菌、产?-内酰胺酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性.结果表明,43株分离菌的大多数可产生?-内酰胺酶,3株鸡志贺氏菌为ESBLs阳性菌株.30株分离产酶菌均对阿莫西林、氨苄西林耐药(MIC≥32 μg/ml),16株非产酶菌(标准菌株及分离株)中的15株对阿莫西林、氨苄西林敏感,只有一株非产酶分离菌耐药.氨苄西林与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时,其对分离产酶菌的MIC值分别降低10~40倍、10~20倍.临床致病菌对三代头孢均敏感,与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时,三代头孢的MIC值不变.当头孢噻呋、头孢曲松与舒巴坦以2∶1配比联用时,其对产ESBLs菌的MIC值降低2～4倍.
- 胡功政张春辉梁军余华王升运杨玉荣
- 关键词：ESBL致病菌酶检测分离菌头孢噻呋
