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排序方式：

含发夹结构的Gateway质粒DNA测序方法改进: 2008年; Gateway克隆技术现已广泛用于cDNA文库构建。然而,用常规DNA测序程序对Gateway cDNA进行测序时,反向重复的att序列易形成发夹结构,导致测序质量较差,且测得的序列较短,成为Gateway克隆技术应用的限制因素。本研究报道了1种Gateway cDNA克隆高温变性测序方法,即在Gateway cDNA测序PCR反应之前,先将DNA在98℃预变性5 min,可有效防止测序峰值的快速下降,极显著地增加Gateway cDNA克隆测序长度(质量Q≥20的序列平均长度从528 bp提高到816 bp)。该方法在常规DNA测序程序的基础上仅新增了5 min的高温预变性,不增加任何实验成本和操作步骤,非常适合Gateway质粒DNA的大规模测序。; 刘耘熊家军杨利国; 关键词：DNA测序发夹

哺乳动物体细胞克隆的研究进展被引量：2: 2008年; 随着克隆技术的发展,哺乳动物体细胞克隆在生物学、医学等领域有着越来越重要的价值,近年来,克隆技术不断完善,克隆方法不断优化,取得了很多重要的成果,但在成功率等方面仍存在许多难以攻破的问题。作者重点阐述了胞质内全细胞直接注射法这一技术在哺乳动物体细胞克隆上的应用情况,旨在阐明国内外哺乳动物体细胞克隆的研究现状,为进一步提高克隆成功率提供参考。; 王滇于孟飞张春燕刘松柏杨利国; 关键词：哺乳动物体细胞克隆

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响被引量：2: 2009年; 本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin和7%乙醇的处理时间为5 min,6-DMAP的处理时间为4 h,CHX的处理时间为5 h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2 d后,各组卵裂率分别为52.6%、52.8%、53.8%和54.2%,差异不显著(P>0.05);培养8 d后,Ⅰ组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P<0.01),其他各组之间差异不显著,分别为8.5%、10.2%和6.1%;培养10 d后,Ⅰ组激活的囊胚孵化率(10.7%)极显著高于其他组(P<0.01),其他各组之间差异不显著,分别为2.3%、3.0%和1.8%。结果提示,4种激活方法均可以有效的激活重构胚,但Ionomycin+6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其它3组,说明Ionomycin+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。; 王滇张春燕刘松柏杨利国; 关键词：卵母细胞化学激活

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国家科技支撑计划(2006BAD04A02-11)