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中华国际医学交流基金(CIMF-CR-08-02)

作品数：1 被引量：0H指数：0
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文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
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  • 1篇帕金森
  • 1篇帕金森病
  • 1篇转染
  • 1篇核表达
  • 1篇MYC
  • 1篇PINK1
  • 1篇COS-7细...

机构

  • 1篇广东省人民医...

作者

  • 1篇刘越存
  • 1篇张玉虎
  • 1篇李少华
  • 1篇王丽娟

传媒

  • 1篇中国医师杂志

年份

  • 1篇2009
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
帕金森病PINK1蛋白真核表达载体pcDNA3．1-myc／PINK1的构建及其在COS-7细胞中的表达
2009年
目的构建帕金森病PINK1基因真核表达载体pcDNA3．1-mye／PINK1，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法用PCR方法从人cDNA文库DNA中扩增PINK1全长cDNA，该基因片段两端设计了EcoR I和BamH I限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将PINK1的cDNA构建到真核表达载体pcDNA3．1-myc—his（-）B上，酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术将所构建的载体导入COS-7细胞中，体外培养，于转染48h后利用RT—PCR和Western Blotting方法检测目的基因的表达情况。主要观察指标：（1）PINK1基因cDNA扩增产物检测。（2）pcDNA3．1-myc／PINK1重组体酶切鉴定。（3）Western—blotting。结果经琼脂糖凝胶电泳及测序证实，PCR获得的片段与GenBank中登记的PINK1序列完全相同；pcDNA3．1-myc／CHIP酶切片段的长度与理论大小相符；转染48h后的COS-7细胞可检测到PINK1蛋白的表达。结论PINK1蛋白真核表达载体构建成功，在COS-7细胞中可获得表达。
张玉虎刘越存李少华王丽娟
关键词：转染
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