国家自然科学基金(30370785)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
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- SH_2A抑制IGFⅡ诱导的抗凋亡作用
- 2009年
- 为研究SH2A的生物学特性,构建野生型和缺陷型SH2A表达载体,通过流式细胞术和蛋白激酶C(PKC)活性检测,研究其对细胞凋亡的影响.研究结果显示SH2结构域是SH2A的主要功能域;SH2A可以诱导细胞快速进入凋亡晚期而促进细胞凋亡;同时发现SH2A抑制胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factorⅡ,IGFⅡ)的抗凋亡作用,并阻滞IGFⅡ诱导的Ca2+释放和PKC激活.因此,SH2A可能通过抑制PKC信号通路而促进细胞凋亡.
- 李婷婷李伟吕晶玉刘洪李英慧赵彦艳
- 关键词：细胞凋亡PKC
- SH2D4A互作蛋白的筛选及初步鉴定被引量：1
- 2010年
- SH2D4A是SH2蛋白家族成员之一,可能参与酪氨酸蛋白激酶相关受体介导的信号转导,调节细胞的生长、增殖和分化,进而影响人类疾病的发生。文章运用酵母双杂交技术筛选SH2D4A相互作用蛋白,并利用酵母交配(mating)实验和GST pull-down实验进行了初步鉴定。首先成功构建了酵母诱饵蛋白重组表达载体pGBKT7-SH2D4A;利用该重组体对人肾脏cDNA文库进行逐级筛选,共得到46个阳性克隆;经目的基因的分离、DNA测序及BLAST软件对序列进行比对分析,发现5种可能的SH2D4A互作蛋白(AZGP1、DAD1、HSD17B10、KAT5和PKM2);NetPhos 2.0 Server软件预测结果显示除HSD17B10外其他4种蛋白均含有磷酸化酪氨酸;进一步以KAT5和HSD17B10作为代表进行了酵母交配和GST pull-down,证实两者均可直接结合SH2D4A。
- 李伟李婷婷刘洪赵彦艳
- 关键词：酵母双杂交技术GST蛋白质相互作用SH2结构域
- SH_2A基因对细胞信号转导的影响及其亚细胞定位被引量：5
- 2003年
- 目的 研究 Src同源域 2 (src homology2 ,SH2 ) A基因在细胞信号转导中的作用并进行亚细胞定位。方法 通过 RT- PCR方法扩增 SH2 A c DNA编码序列 ,构建真核重组表达载体 pc DNA3.1-SH2 A,利用脂质体转染肝癌 Bel74 0 2细胞、COS7细胞 ,检测蛋白酶 C(protein kinase C,PKC)、酪氨酸蛋白激酶 (tyrosine protein kinase,TPK)、丝裂原激活蛋白激酶 (mitogen activated protein kinase,MAPK)活性的改变 ;另构建 p EGEP- SH2 A,转染同前 ,荧光显微镜观察荧光定位。结果 测序结果显示真核重组表达载体 pc DNA3.1- SH2 A及 p EGFP- SH2 A中均含有 SH2 Ac DNA编码序列 ;肝癌 Bel74 0 2细胞、COS7细胞转染pc DNA3.1- SH2 A后 ,胞浆 PKC的活性下降了 4 0 %左右 ,MAPK和 TPK活性未见明显改变。荧光显微镜观察发现 SH2 A基因在细胞质中表达。结论 SH2 A基因编码蛋白在 PKC信号转导通路中起抑制作用 ;SH2 A基因编码蛋白定位于细胞质。
- 丁茜赵彦艳孙志军于大海
- 关键词：细胞信号转导亚细胞定位蛋白激酶C肿瘤
