国家自然科学基金(39770036)
- 作品数：22 被引量：64H指数：5
- 相关作者：秦鄂德于曼杨佩英赵卫胡志君更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)被引量：1
- 2002年
- 观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 .
- 陈水平秦鄂德于曼胡志君赵卫范宝昌王鹏程杨佩英
- 关键词：免疫原性登革病毒DNA免疫
- 登革2型病毒PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒作用的研究被引量：3
- 2001年
- 将扩增的登革 2型病毒株PrM基因导入pSFV载体的SP6启动子下游 ,筛选出含该基因正、反向插入的重组质粒DNA。用SpeI酶分别将重组的和辅助的质粒DNA线性化 ,并将其体外转录成 5′末端含帽子结构的RNA。再将这两种RNA共转染BHK细胞。然后将转染的宿主细胞用登革 2型病毒株攻击 ,并分别观察含正、反义PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒效果。通过碱基序列测定 ,筛选出含PrM基因正、反向插入的pSFV PrM重组质粒。并获得了经重组RNA与辅助RNA共转染细胞而产生的重组病毒颗粒。含有反义PrM基因的重组病毒RNA ,在宿主细胞中具有抗登革 2型病毒复制的作用 ,而且强于含正义PrM基因的重组病毒RNA。
- 于曼秦鄂德赵卫胡志君苑锡同
- 关键词：登革2型病毒抗病毒作用
- 新分离的无乳鼠神经毒力的登革2型病毒福建株基因组结构特征的研究
- 2002年
- 目的 测定对乳鼠不致病登革 2型病毒福建株 (DEN2 FJ11)全基因组序列 ,探讨其基因组结构与功能关系。方法 采用RT PCR和 5′、3′端RACE方法测定病毒基因组的全序列 ,并运用DNASTAR软件的Clustal法将该毒株的序列与其它 6株登革 2型病毒进行比较 ,分析其进化关系。结果 DEN2 FJ11株基因组全长 10 72 3个核苷酸 ,含有 1个单一的读码框架 ,编码 3391个氨基酸。 5′、3′端非编码区 (NCR)长度分别为 96和 45 4个核苷酸。DEN2 FJ11与同时分离的对乳鼠致病的FJ10株之间共有 32个核苷酸不同及 13个氨基酸的变化 ,其中 8个氨基酸是其极性或电荷的改变。 3′端非编码区 134位的单个核苷酸变化导致其二级结构改变。DEN2 FJ11与FJ10株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为 99.7%和 99.6 %,这 2株病毒与印度尼西亚株亲缘关系最近 ,同为Ⅳ基因型。结论 DEN2 FJ11株基因组与FJ10株及其它登革 2型病毒株类似。位于病毒编码区的 8个氨基酸差异及 3′端非编码区 134位的核苷酸可能与病毒的乳鼠神经毒力有关。
- 于曼赵月峨胡志君苑锡同耿丽卿赵卫范宝昌王鹏程陈水平段鸿元杨佩英秦鄂德
- 关键词：全基因组登革热
- 登革2型PrM基因的重组病毒对不同型别登革病毒复制的阻断作用
- 2002年
- 观察登革 2型PrM基因的pSFV重组甲病毒抗该型病毒的作用 ,进一步探讨登革 2型PrM基因的这种重组病毒对其它 3个血清型登革病毒复制的阻断作用 .采用体外转录和电穿孔 ,分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RNA ,然后将这两种RNA共转染BHK细胞 ,进而包装成重组病毒颗粒 .再将激活的重组病毒感染细胞 ,分别用不同型病毒进行攻击 .然后通过免疫荧光法 ,观察对登革病毒复制的阻断作用 .结果表明 ,含登革 2型PrM基因的重组病毒不仅可阻断登革 2型病毒的复制 ,同样具有抑制其他 3个型病毒复制的能力 ,且抗登革 1、4型病毒的复制作用强于抗登革 3型病毒的作用 .用 10 3 TCID50 剂量的登革病毒攻击 ,含反义PrM基因的重组病毒可完全阻断登革 1、3、4型病毒的复制 .但含正义PrM基因的重组病毒对登革 3型病毒的复制不能完全阻断 .
- 于曼秦鄂德陈水平赵月峨范宝昌段鸿元姜涛杨佩英胡志君
- 关键词：重组病毒登革病毒病毒复制阻断作用
- 我国登革2型病毒prM-E基因与SFV病毒载体重组RNA的构建被引量：2
- 2000年
- 目的 :构建我国登革 2型病毒 4 3株prM E基因的甲病毒 (Semlikiforestvirus ,SFV)重组RNA ,为登革新型疫苗的研究奠定基础。方法 :首先将含有多种稀有限制酶位点的接头插入pSFV载体的多克隆位点 ,再把prM E基因克隆至该载体中。将获得的重组质粒DNA经体外转录后 ,通过电穿孔法将其转录的RNA产物导入宿主细胞 ,并采用间接免疫荧光法检测prM E基因的表达。结果 :已获得含多种酶位点的pSFV病毒载体 ,并且所构建的含prM E基因的重组pSFV病毒RNA ,在宿主细胞中的表达产物可与登革 2型病毒特异抗体起反应。结论 :构建的含prM E基因的重组pSFV病毒RNA可表达我国登革 2型病毒株的特异蛋白。
- 陈水平秦鄂德于曼赵卫欧武杨佩英
- 关键词：登革热病毒重组病毒
- 我国登革2型病毒43株PrM-E基因的DNA免疫原性研究被引量：4
- 2000年
- 目的 观察我国登革 2型病毒 43株PrM E基因的DNA免疫原性及非甲基化细菌性CpG对DNA免疫效果的影响。方法 采用RT PCR和分子克隆技术构建PrM E基因片段 ,并将其插入真核表达载体pBK CMV中。在证明其可在哺乳动物细胞中高效表达的基础上 ,进一步用重组质粒DNA免疫小鼠。通过间接免疫荧光法对采集的鼠血清中的病毒特异抗体进行检测。结果 用含PrM E基因的重组质粒DNA免疫小鼠可诱导产生登革 2型病毒特异的抗体 ,且产生的抗体在小鼠体内可持续 3周以上。用含CpG的pUC19质粒和重组质粒的共免疫与单独免疫重组质粒所诱导的抗体水平没有显著差别。结论 我国登革 2型病毒PrM E基因重组质粒DNA具有一定的免疫原性。在本实验条件下 ,含非甲基化细菌性CpG的pUC19质粒DNA ,对PrM E基因的DNA免疫效果没有促进作用。
- 仝莉莉秦鄂德杨佩英于曼李同据欧武
- 关键词：登革病毒DNA免疫
- 我国登革3型病毒广西株基因组非编码区结构特征的研究被引量：1
- 2001年
- 应用cDNA末端快速扩增法 (RACE) ,获得我国登革 3型病毒株基因组的包括 5′和 3′端非编码区的扩增片段 ,经琼脂糖凝胶电泳观察其长度分别为 710bp和 470bp。序列分析表明 ,与登革 3型病毒菲律宾株 (H87株 )核苷酸序列同源性 >99%。进化树分析提示 ,该株病毒属于登革 3型病毒Ⅰ亚型。基因组的 5′和 3′端可能含有较强的二级结构域。
- 苑锡同李晓萸耿丽卿于曼陈水平范宝昌秦鄂德
- 关键词：RACE登革3型病毒CDNA非编码区
- 我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建被引量：2
- 2001年
- 目的 构建我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA ,为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性 ,阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法 根据登革 2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列 ,利用DNASTAR软件设计覆盖登革 2型病毒 43株基因组的 6对重叠引物。从感染登革 2型病毒 43株的乳鼠脑中提取病毒基因组RNA ,采用RT PCR分别扩增 6条基因片段 ,并将其分别与pGEM T载体进行连接。重组质粒用PCR进行快速鉴定 ,并在 377A型自动测序仪进行序列分析。然后利用单一酶切位点 ,分别自阳性重组子上切下各基因片段 ,在体外分别进行 5′半分子和 3′半分子的连接 ,最后将 5′和 3′半分子连接成基因组全长的cDNA。扩增各接头两侧长约 45 7～ 6 91bp的基因片段 ,连接至T载体后测序 ,从而对全长cDNA进行鉴定。结果 共扩增出 6条约 1 5～ 2 5kb的基因片段 ,并在体外进行连接 ,获得了全长cDNA。结论 通过测序证实成功地构建了我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明我国登革病毒株的毒力及致病机理奠定基础。
- 欧武秦鄂德杨翠红杨佩英于曼
- 关键词：登革病毒感染基因组全长CDNA登革病毒
- 我国登革 4型病毒 B5株基因组全序列的测定及分析(英文)被引量：5
- 2001年
- 对我国登革 4型病毒 B5株 (D4- B5)基因组进行全序列测定及分析 ,为研究病毒基因组结构与功能的关系及研制新型登革疫苗奠定基础 .根据登革 4型病毒 81 4669株的序列设计特异引物 ,通过 RT- PCR扩增出 D4- B5株不同长度的片段 ,分别克隆到 p GEM- T载体 ,将挑取的阳性克隆进行 PCR、酶切鉴定及序列测定 .结果显示 ,D4- B5株的基因组全长 1 0 665nt,5′和 3′非编码区分别为 1 0 1 nt和 40 3nt,中间一个长 1 0 1 61 nt的开放读码框架 ,编码 3387个氨基酸 .与 D4- 81 4669株比较 ,两者核苷酸序列同源性为 93.0 8% ,氨基酸序列同源性为 96.58% .D4- B5株的基因组全序列与 D4- 81 4669株类似 ,但也有较大差异 .同源进化分析表明 ,D4- B5株的基因型为 型 ,与登革 4型病毒菲律宾分离株亲缘关系较近 .这是首次报道的我国登革 4型病毒分离株基因组全序列 ,对研究病毒基因组结构与功能的关系 ,探讨我国毒株的地理来源及研制适合我国人群的新型登革疫苗具有一定的意义 .
- 王鹏程秦鄂德于曼耿丽卿赵卫胡志君苑锡同杨佩英
- 关键词：登革病毒基因组
- 多引物RT-PCR技术用于登革病毒的检测及快速分型被引量：2
- 2000年
- 目的 :建立登革病毒的多引物PCR检测方法 ,并对不同血清型的登革病毒进行快速分型。方法 :根据不同型别登革病毒基因组之间的保守性及型特异核苷酸序列合成相关引物 ,采用RT PCR的方法扩增登革病毒RNA ,电泳观察扩增产物的特异性和分型情况。结果与结论 :组合引物的扩增产物具有登革病毒的型别特异性 ,可对登革病毒进行快速分型 ,该方法具有敏感、特异、快速等优点。
- 苑锡同耿丽卿于曼赵卫胡志君王鹏程杨佩英秦鄂德
- 关键词：登革病毒
