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转基因兔乳汁中重组吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的纯化、结构分析和药效研究: 用溶栓药消除血栓是一种临床常用的方法。现有的溶栓药虽然有明确的治疗效果，但也存在治疗窗口期窄，用药量大，纤维蛋白特异性低，再灌注率低，系统出血率高，半衰期短，副作用大等问题。而纤维蛋白特异性高，溶栓效率高，出血风险低，半...; 张婷; 关键词：溶栓药物转基因技术; 文献传递

人白细胞介素-2原核表达条件优化和表达产物纯化被引量：3: 2013年; 通过构建原核表达载体、优化原核表达条件和纯化表达产物来获得人白细胞介素-2(IL-2)的融合蛋白(His-IL2)。将IL-2基因连接到pET100/D-TOPO载体中,经酶切鉴定和测序,构建了pET-IL2质粒。将质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,通过优化诱导温度、诱导时间及IPTG诱导终浓度来减少包涵体的生成,从而提高可溶性蛋白的产量,由SDS-PAGE和Western blot证明IPTG诱导终浓度为0.6 mmol/L、温度为25℃,诱导5 h时可溶性蛋白含量明显高于包涵体,且该融合蛋白能够被特异性抗体所识别。分别以葡聚糖凝胶层析和Ni-IDA树脂亲和层析纯化His-IL2融合蛋白,比较两种不同的纯化方法对其蛋白纯化效率的影响,SDS-PAGE分析得出Ni-IDA树脂亲和层析对此融合蛋白纯化的特异性高,纯度达到85%左右。His-IL2融合蛋白的优化表达和纯化为进一步研究融合蛋白的活性与功能奠定了基础。; 吉学桥张利清陆睿成勇; 关键词：IL-2 可溶性蛋白蛋白纯化

重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测被引量：4: 2015年; 人组织纤溶酶原激活剂(ht-PA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品,应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有报道,但重组人纤溶酶原激活剂(rh PA)在转基因动物中表达尚未见报道。设计了以人t-PA的F、E、K1区位点缺失体为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子,构建了乳腺特异性表达载体PCL25/rh PA,通过受精卵原核显微注射法制备转基因兔。用PCR检测及其产物测序筛选转基因兔,ELISA试剂盒及纤维蛋白平板溶圈法检测转基因兔的表达产物。实验获得原代转基因兔5只(2♂,3♀),其中2只乳腺中表达人重组纤溶酶原激活剂,rh PA浓度最高可达400μg/m L,表达产物比活性是现有阿替普酶的150-200倍。实验结果表明,重组人纤溶酶原激活剂(rh PA)可以在山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子调控下获得乳腺特异性表达,表达重组蛋白具有较高的溶栓活性。; 陆睿宋绍征祁正强葛欣邵宾成勇; 关键词：转基因兔乳腺特异性表达

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江苏省科技支撑计划项目(BE2013679)