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国家自然科学基金(29675017)

作品数:7 被引量:54H指数:4
相关作者:耿信笃王骊丽韩骅刘彤陈强更多>>
相关机构:西北大学第四军医大学宝鸡文理学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
相关领域:理学生物学医药卫生化学工程更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 3篇理学
  • 2篇医药卫生
  • 1篇生物学
  • 1篇化学工程

主题

  • 4篇色谱
  • 2篇重组蛋白
  • 2篇复性
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白质
  • 1篇阳离子
  • 1篇阳离子交换
  • 1篇液相
  • 1篇液相色谱
  • 1篇色谱法
  • 1篇色谱复性
  • 1篇人干细胞因子
  • 1篇重组蛋白表达
  • 1篇转录
  • 1篇组蛋白
  • 1篇细胞因子
  • 1篇相色谱
  • 1篇离子
  • 1篇离子交换
  • 1篇酶链反应

机构

  • 5篇西北大学
  • 2篇第四军医大学
  • 1篇宝鸡文理学院

作者

  • 5篇耿信笃
  • 3篇王骊丽
  • 2篇韩骅
  • 1篇刘彤
  • 1篇卫引茂
  • 1篇黄晓冬
  • 1篇陈强

传媒

  • 1篇分析化学
  • 1篇西北大学学报...
  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇色谱
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇Chines...

年份

  • 1篇2005
  • 1篇2004
  • 1篇2003
  • 3篇2000
7 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
脲梯度体积排阻色谱复性并同时纯化rhSCF被引量:6
2005年
目的:用脲梯度体积排阻色谱(SEC)复性并同时纯化在大肠杆菌中高表达的人干细胞因子.方法:采用脲梯度SEC,根据蛋白质与小分子物质分离过程的迁移速度不同的原理,在色谱过程中通过脲浓度的线性梯度洗脱方式脱除变性剂脲而达到蛋白复性并同时纯化.结果:用脲梯度SEC复性重组人干细胞因子(rhSCF)能够使复性蛋白的产率提高,色谱过程中洗脱长度、流速以及蛋白浓度的变化对蛋白复性效率都有不同的影响.结论:用脲梯度SEC复性rhSCF可以使复性产率提高,其质量回收率从35.2%提高到51.4%.
王骊丽耿信笃
关键词:色谱法大肠杆菌
基因工程中的液相色谱被引量:24
2000年
对液相色谱用于基因工程生产蛋白质分子构象、变性蛋白的复性、蛋白折叠中间体等方面的研究进展,以及液相色谱在基因工程样品的质量检验、制备方面的新进展分别加以评述。全文引用了42篇文献。
刘彤耿信笃
关键词:基因工程液相色谱分离纯化
人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究被引量:3
2003年
从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达,表达的目的蛋白可占菌体总蛋白的55%。用5L和50L发酵罐放量生产的产物,经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品,其比活性与天然蛋白相近。
王骊丽耿信笃韩骅
关键词:反转录聚合酶链反应重组蛋白表达
可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化被引量:7
2004年
目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌中的高效表达 ;用MTT比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性。结果 :扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA。将其插入表达载体pBV2 2 0构建了hSCF基因的表达质粒 ,并在大肠菌中初步表达。表达量占总菌体的 2 0 %以上 ,优化培养条件后表达量可达到 4 0 %以上 ,表达产物为包涵体。将包涵体溶解在 8mol/L脲或 7mol/L盐酸胍中 ,用疏水色谱法进行复性并同时纯化 ,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白。结论 :成功地克隆hSCF基因 ,并实现在原核系统中的高表达 ,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品。
王骊丽耿信笃韩骅
关键词:人干细胞因子重组蛋白
连续棒状弱阳离子交换柱的合成及其对蛋白质保留行为被引量:17
2000年
以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂在空管柱内就地 聚合制备了一种聚合物连续棒状色谱基质,并通过“在线”化学改性将其修饰为弱阳离子交换 柱。考察了该色谱柱的孔结构特征、表面亲水性能、对标准蛋白的分离效果和pH值对保留 行为的影响以及色谱柱的重现性。结果表明,该色谱柱对蛋白的分离性能及重现性良好,柱 寿命不短于半年。对溶菌酶的活性回收率达96.2%。流动相流速为 8.0mL/min条件下,在 3.5
卫引茂黄晓冬陈强耿信笃
关键词:蛋白质
Purification of RhIFN- in Bacteria Bodies with Acetic Acid-Water as Mobile Phase in RPLC
2000年
Tile extract of E.coli containing recombinant human inteferon- (rhIFN-) with 7.0 mol/L guanidine hydrochloride ((Gu’IICl) was directly injected into a column of reverse phase liquid chromatography (RPLC) to separate and purify rhIFN- with acetic acid-water as mobile phase. Gu.HCI and most impure protcins call be separated by this way. Compared with the usual dilution method, the bioactivity recovery of tile purified rhIMN- was found to be over 500%. In addition. compared to common organic solvents employed in RPLC, acetic acid has higher freezing point. and therefore, it is easy to concentrate tile aim-protein by freeze-drying when acetic acid-water is used as Inobile phase in RPLC.
Ye Hua SHEN
关键词:REVERSED-PHASEINTERFERONPURIFICATION
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