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Cupin家族食物性过敏原表位研究进展被引量：8: 2011年; Cupin蛋白家族是一个具有多种功能蛋白的家族,它的进化可以追溯到从古细菌、细菌到真核生物。cupin来源于拉丁语＂cupa＂,是指由至少6个β-折叠片形成的桶状结构。根据蛋白中含有cupin结构域的数目而把它们分类成不同的cupin亚群。具有两个cupin结构域的蛋白最初是在高等植物种子储藏蛋白中发现的。它们分为7S球蛋白三聚体（豌豆球蛋白）和11S球蛋白六聚体（豆球蛋白）。; 李平王转花; 关键词：食物过敏原表位关键氨基酸

截短型rBTI的表达、纯化及其对EC9706细胞生长的抑制作用被引量：1: 2011年; 依据先前获得的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)氨基酸序列及三维分子构像,分别构建了rBTI C末端缺失VVM、TPVVM或VDTPVVM的截短型pExsecI-BTI-t1,pExsecI-BTI-t2和pExsecI-BTI-t3重组质粒.转入大肠杆菌BL21中进行表达,并通过Resource Q阴离子交换层析分离.实验结果显示,3个工程菌均以可溶方式表达,目的蛋白在SDS-PAGE图谱中显示单一条带,其纯度达98%以上.理化性质分析表明,截短型rBTI与野生型rBTI具有相似的胰蛋白酶抑制活性,并具有很好的热稳定性及酸碱稳定性.将野生型和截短型rBTI分别作用于人食管癌EC9706细胞.MTT检测发现,C末端截短不同数目的氨基酸后,与野生型rBTI相比,在相同浓度下截短型rBTI仍具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,其抑制作用范围是截短前的50%左右.这些结果提示,rBTI的C末端氨基酸残基缺失未引起活性区域或功能部位的较大改变,从而保留了其对胰蛋白酶的抑制作用和部分生物学功能.; 李静舒李玉英崔晓东王转花; 关键词：理化性质细胞凋亡

特异性过敏原TBt多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2011年; 目的:制备特异性苦荞主要过敏原TB t的多克隆抗体,为深入研究TB t分子中各结构域的功能奠定基础。方法:通过盐析,离子交换层析,分子筛层析等方法从苦荞种子中纯化出过敏蛋白TB t,免疫新西兰兔子,制备多克隆抗体。用间接ELISA、W estern b lot检测该抗体的效价和特异性;竞争ELISA研究IgG抗体对TB t过敏患者血清IgE的抑制作用。结果:间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶256 000左右;W estern b lot显示该抗体能与TB t蛋白特异结合;竞争ELISA表明制备的IgG抗体能够特异性抑制荞麦过敏患者血清IgE与过敏蛋白的结合。结论:制备的TB t多抗血清具有较高的效价和良好的特异性,该多克隆抗体可用于TB t的免疫活性鉴定,为下一步研究该蛋白的分子特征及免疫治疗奠定了基础。; 杨振煌崔晓东李平李玉英王转花; 关键词：苦荞多克隆抗体

一种薏苡抗真菌蛋白的制备及抑菌活性研究被引量：10: 2012年; 以薏苡(Coix chinensis)种子为实验材料,通过脱脂、水提、Resource S阳离子交换层析和Superdex 75凝胶排阻层析等步骤纯化得到一种新的抗真菌蛋白,并对其抑菌活性进行初步鉴定。SDS-PAGE分析显示该蛋白的分子质量约为28kD。抑菌活性鉴定表明,该蛋白对链格孢霉(Alternaria alternate)、绿色木霉(Trichoderma reesei)和白腐菌(Panus conchatus)3株丝状真菌具有显著的生长抑制活性,并呈现出剂量依赖的特征。本研究建立分离薏苡28kD抗真菌蛋白的方法,制备方法简单易行,所得产品纯度达到95%以上。; 李晨白承之李玉英王转花; 关键词：抗真菌蛋白纯化

荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂制备被引量：2: 2011年; 以天然苦荞过敏蛋白包被聚苯乙烯微孔板,以鼠抗人IgE抗体标记辣根过氧化物酶,以间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,IELISA)检测病人血清中的特异性抗体,分析并建立关键操作步骤及反应条件。结果表明:ELISA反应的最适工作条件为包被的抗原质量浓度100μg/mL、阳性血清稀释度1:50、酶标二抗稀释度1:1000,37℃时封闭的最佳时间为40min,包被抗原与阳性血清中抗体的最佳作用时间为40min,阳性血清与酶标二抗的最佳作用时间为40min。本方法具有良好的特异性、重复性和精密度。; 张昕崔晓东王转花; 关键词：苦荞试剂盒

苦荞芦丁水解酶的最适作用条件及Cu^2＋对酶活性的抑制被引量：2: 2012年; 干燥的苦荞麦种子粉碎后经20mmol/L的醋酸盐缓冲液抽提,Resource Q和Superdex G75 HR 10/300凝胶柱分离纯化,得到一种芦丁水解酶,测定该酶的最适作用条件,研究Cu2+对该酶的抑制作用。结果表明:苦荞芦丁水解酶的分子质量约70kD,最适作用pH值为5.0。反应体系选择20%乙醇时,可保留酶的活性不被抑制,当乙醇体积分数大于50%时,对酶的活性抑制率达90%以上,表明可选用低体积分数乙醇作为芦丁的溶剂,用于芦丁水解酶测活体系及后续槲皮素制备研究。荧光光谱表明,Cu2+与芦丁水解酶以物质的量比1:1的形成稳定的复合物,可以使酶的荧光发生猝灭,水解芦丁的活性降低。表明Cu2+对芦丁水解酶有抑制作用。; 崔晓东王转花; 关键词：苦荞芦丁槲皮素荧光光谱

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山西省科技攻关计划项目(20100321101)