国家自然科学基金(30770947)
- 作品数：6 被引量：36H指数：3
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- 肺癌细胞中可溶性程序性死亡配体1的表达及其对T淋巴细胞功能的影响被引量：16
- 2013年
- 目的观察可溶性程序性死亡配体1（sPD—L1）在不同肺癌细胞中的表达特性，并探讨其对人T淋巴细胞生物学功能的影响。方法采用流式细胞术检测肺癌细胞表面膜型PD-L1（mPD-L1）和人外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体1（PD-1）的表达水平，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺癌细胞分泌的sPD—L1的表达，采用CCK-8法检测mPD．L1和sPD．L1对T细胞增殖的抑制作用。结果PD-1在人外周血静止T淋巴细胞中的表达水平为（16．08±2．28）％，而在活化T淋巴细胞中的表达水平为（78．06±7．21）％。mPD-L1在H1299、H08910、SPAC．1、H460和H446细胞中的表达水平分别为（78．34±10．25）％、（68．17±11．56）％、（45．32±7．98）％、（47．52±9．62）％和（40．95±8．56）％，而在A549细胞中的表达水平为（16．02±6．28）％。sPD．L1在H1299、H08910、SPAC-1、H460和H446细胞中的表达水平分别是（0．17±0．01）ng／ml、（0．30±0．03）ng／ml、（0．59±0．03）ng／ml、（0．34±0．02）ng／ml和（0．57±0．03）ng／na，而在A549细胞中不表达。CCK-8体外实验结果显示，活化T淋巴细胞＋H1299细胞＋mIgG组和活化T淋巴细胞＋H1299细胞＋α-PD-L1组的A值分别为0．924-0．09和1．284-0．13，差异有统计学意义（P〈0．05）。活化T淋巴细胞＋H1299细胞上清＋d—PD-L1组和活化T淋巴细胞＋H1299细胞上清＋mIgG组的A值分别为0．92±0．03和0．68±0．03，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肺癌细胞表达的mPD-L1和sPD-L1均可有效抑制T淋巴细胞增殖，发挥细胞免疫的负性调节作用，这可能导致肿瘤抗原特异性T淋巴细胞失活和肿瘤细胞免疫逃逸。
- 施敏骅邢玉斐张增利黄建安陈永井
- 关键词：T淋巴细胞细胞免疫免疫逃逸
- 肺癌患者支气管肺泡灌洗液游离RNA测定的临床意义被引量：1
- 2009年
- 目的探讨肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆游离磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的表达及其临床意义。方法以确诊的43例肺癌作为实验组,17例肺部良性病变作为对照组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应测定BALF上清和血浆中游离GAPDH mRNA的拷贝数。常规细胞学方法检测BALF脱落细胞。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析方法评价游离RNA诊断价值。结果(1)肺癌及良性疾病组BALF和血浆中均可检测到游离RNA的存在。(2)肺癌患者BALF中游离RNA拷贝数明显高于肺良性病变组(P<0.01),但血浆中游离RNA两组比较差异无统计学意义。(3)BALF细胞学检查肿瘤细胞阳性组游离RNA拷贝数明显高于阴性组(P<0.05)。(4)肺癌游离RNA拷贝数在不同的病理类型、临床分期中无统计学差异(P>0.05)。(5)ROC曲线分析BALF游离RNA对肺癌的诊断价值:当特异性为100%和90%时,诊断的敏感性分别为65.3%和70.1%,ROC曲线下面积达0.832。结论应用荧光定量PCR方法检测BALF中游离RNA诊断肺癌具有较高的特异性和敏感性。
- 李威黄建安穆传勇岑建农
- 关键词：肺癌支气管肺泡灌洗液受试者工作特征曲线
- CD40信号通过TNFRⅠ途径抑制肺癌细胞增殖的研究被引量：9
- 2009年
- 背景与目的:CD40活化信号可抑制多种肿瘤细胞体外生长 ,但其分子机制尚不明确,本研究旨在探讨激发CD40信号对肺癌细胞株NCI-H460、A549的增殖及肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)、膜型TNF-α(mTNF-α)表达的影响及相关机制。方法:免疫荧光标记和流式细胞术检测肺癌细胞表面CD40的表达以及激发CD40对细胞表面TNFR和mTNF-α表达谱的影响;Westernblot检测激发CD40对细胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表达的影响;采用四氮唑盐(MTT)比色法抗体中和实验分析阻断TNFRⅠ及TNF-α对CD40激发效应的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测激发CD40对肺癌细胞培养上清中可溶性TNF-α(sTNF-α)含量的影响。结果:(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549表面CD40表达分别为(89.0±3.2)%、(62.2±4.5)%。(2)免疫荧光和流式细胞术示,激发NCI-H460和A549细胞表面CD40分子48h后,其表面TNFRⅠ表达率分别为(36.2±4.6)%、(38.5±5.9)%,较对照组分别为(7.2±1.9)%、(15.2±3.1)%明显升高(P<0.05);而其表面TNFRⅡ表达率分别为(5.8±1.2)%、(18.0±1.6)%,较对照组分别为(38.8±4.3)%、(58.1±3.6)%明显降低(P<0.05);其表面TNF-α表达率分别为(7.0±0.9)%、(8.7±1.1)%,较对照组分别为(15.0±2.1)%、(26.5±3.2)%也明显降低(P<0.05)。(3)Western blot示,激发CD40可使NCI-H460和A549细胞TNFRⅠ蛋白表达增强,TNFRⅡ蛋白表达减弱,而mTNF-α蛋白表达无明显变化。(4)CD40激发前后肺癌细胞培养上清中未检测到sTNF-α的存在。(5)激发CD40能明显抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P<0.05),而阻断TNFRⅠ后CD40信号的细胞增殖抑制效应消失。(6)阻断TNF-α亦可明显抑制两肺癌细胞株增殖(P<0.05),而同时激发CD40未见两者存在协同效应。结论:CD40信号是通过mTNF-α/TNFRⅠ途径抑制CD40表达阳性肺癌细胞株的体外增殖。
- 卢旭东朱晓兰陈成张光波张学光黄建安
- 关键词：CD40肺肿瘤A549细胞细胞增殖
- PD-L1分子在肺癌细胞株上的表达及其生物学意义被引量：8
- 2009年
- 背景与目的目前研究表明,多种人类肿瘤大量表达的PD-L1分子参与了肿瘤免疫逃逸,其机制主要在于肿瘤细胞通过高表达PD-L1分子,与T细胞上的受体PD-1的结合,传递负性调控信号,导致肿瘤抗原特异性T细胞的凋亡和免疫无能。本文着重探讨PD-L1分子在肺癌细胞株上的表达及其对T细胞杀伤效应的调节作用。方法采用常规方法从健康人外周血单个核细胞诱导DCs,并经凋亡肿瘤细胞和激发型CD40单克隆抗体刺激获得成熟DCs,与自体T细胞共育后获得肿瘤特异性CTL细胞;流式细胞术检测肺癌细胞上PD-L1分子的表达;JAM法和单抗阻断实验分析CTL细胞对肺癌细胞株的杀伤效应,ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ的含量。结果经凋亡肿瘤细胞负载的成熟DCs可诱导自体T细胞分化为肿瘤特异性CTL;H1299高表达PD-L1分子(90.3±4.2)%,而A549低表达PD-L1分子(19.4±5.2)%;CTL对A549具有高效特异的杀伤力,而对H1299不能高效杀伤;联合应用PD-L1单抗可促进CTL对H1299的杀伤作用和IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论在肺癌细胞株上表达的PD-L1分子,可降低CTL对肺癌细胞的杀伤效应。
- 陈成穆传勇瞿秋霞朱一蓓孙静张学光黄建安
- 关键词：细胞毒T细胞肺肿瘤PD-L1
- 非小细胞肺癌组织中CD4^＋CD25^high调节性T淋巴细胞检测及其临床意义被引量：1
- 2008年
- CD4^＋CD25^high调节性T淋巴细胞（简称Treg）是近年来确定的一类具有免疫调节功能的T淋巴细胞亚群，在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起重要作用。病理状态下，Treg的增加可促进肿瘤生长，抑制抗肿瘤免疫效应。我们通过检测43例非小细胞肺癌及癌旁组织Treg和白细胞介素（IL）-10、转化生长因子-β（TGF-β）mRNA的表达，初步探讨Treg对肺癌发生浸润的临床意义。
- 穆传勇黄建安陈成於葛华张学光
- 关键词：T淋巴细胞检测肺癌组织调节性转化生长因子-Β抗肿瘤免疫效应
- 人PD-L1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞系中的稳定转染被引量：2
- 2009年
- 目的构建含有人PD-L1基因的真核表达载体,并通过稳定转染获得稳定表达PD-L1分子的HEK293细胞系。方法从人心脏cDNA文库中扩增出PD-L1基因,通过双酶切(Xho1和EcoR1)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染HEK293细胞,通过G418筛选,建立稳定高表达PD-L1分子的HEK293细胞系,通过流式细胞术、RT-PCR及Westernblot分析PD-L1的表达。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/PD-L1,建立了稳定转染PD-L1目的基因的HEK293细胞系。结论成功构建了PD-L1真核表达载体并获得了稳定转染该分子的HEK293细胞系。
- 朱云霞胡振华陈永井李文香陈成黄建安张学光
- 关键词：真核表达载体转染HEK293细胞
