辽宁省科技厅科技攻关项目(2003225007-3)
- 作品数：4 被引量：25H指数：3
- 相关作者：张晓晶刘云鹏王舒宝徐惠绵王甦更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学大连医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EGFR信号通路调控结肠癌Caco-2细胞侵袭转移的分子机制被引量：14
- 2006年
- 目的探讨EGFR信号通路与人结肠癌Caco-2细胞增殖和侵袭转移的关系及其调控分子机制。方法采用MTT法和Boyden小室体外侵袭实验检测Caco-2细胞增殖和体外侵袭能力;采用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2基因转录水平;采用W estern b lot法检测P-EGFR和P-ERK蛋白表达。结果外源性EGF(10μg/L)增加P-EGFR和P-ERK蛋白表达同时使24 h细胞生长率提高了23.35%(P<0.01),使过膜细胞数由(208±3)上升到(241±5)(P<0.01)。当用AG1478(20μmol/L)和PD98059(40μmol/L)分别阻断EGFR和ERK/MAPK后,EGF作用消失,Caco-2细胞生长明显抑制(P<0.01),但无时间效应关系;Caco-2细胞体外侵袭力明显减弱(P<0.01)。RT-PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达和减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478能逆转EGF的作用,使MMP-2、MMP-9 mRNA的表达下降,TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.01)。结论EGFR-ERK/MAPK信号通路通过改变基质金属蛋白酶和其抑制剂mRNA比值调控人结肠癌细胞侵袭转移能力。
- 张晓晶王甦刘云鹏候科佐王舒宝
- 关键词：表皮生长因子受体基质金属蛋白酶
- 表皮生长因子受体信号通路阻断增敏紫杉醇抗黑色素瘤作用的分子机制被引量：2
- 2013年
- 目的研究表皮生长因子受体（EGFR）信号通路调控人黑色素瘤A375细胞发生紫杉醇耐药和逆转耐药的分子机制。方法以不同浓度的紫杉醇、20μmoL／LEGFR阻断剂AGl478、40μmoL／L细胞外信号调节激酶（ERK）1／2阻断剂PD98059和10μmoL／LH3K抑制剂LY294002单独或联合处理A375细胞，采用Western blot法检测不同处理组A375细胞中P-EGFR、P-ERK和p-AKT蛋白的表达，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同处理组A375细胞的增殖抑制情况，采用流式细胞仪检测不同处理组A375细胞的细胞周期和凋亡率。结果0．001、0．01和0．1斗moL／L紫杉醇以时间和浓度依赖方式抑制A375细胞的增殖，AG1478可促进紫杉醇的细胞增殖抑制作用。0．01μmoL／L紫杉醇通过降低G0／G1期细胞含量和延长有丝分裂进程促使A375细胞发生凋亡；而0．1μmL／L紫杉醇则使G2／M期细胞发生阻滞实现细胞凋亡。当A375细胞发生DNA损伤时，可使细胞中p-EGFR、p-ERK和P-AKT蛋白表达均升高；当阻断EGFR信号时，紫杉醇激活MAPK和P^K／AKT信号通路的作用消失，且不影响紫杉醇对A375细胞周期的影响。20μm0L／LAGl478阻断EGFR信号后，可使0．001和0．01μmoL／L紫杉醇诱导A375细胞的早期凋亡率分别提高1．73和1．80倍；40μmoL／LPD98059阻断ERK信号后，可使0．001和0．01μm0L／L紫杉醇诱导A375细胞的早期凋亡率分别提高2．73和2．25倍；10μm0L／LLY294002阻断AKT信号后，可使0．001和0．01μmoL／L紫杉醇诱导A375细胞的早期凋亡率分别提高2．02和1．46倍。结论紫杉醇通过激活MAPK细胞增殖信号通路和P13K／AKT抗凋亡信号通路使黑色素瘤A375细胞产生耐药，阻断EGFR、ERK和AKT3个信号通路靶点可明显增敏紫杉醇的抗黑色素瘤作用。
- 张晓晶张亮刘云鹏徐惠绵孙平宋金纲罗娅红
- 关键词：黑色素瘤表皮生长因子受体细胞外信号调节激酶抗药性
- 紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制被引量：5
- 2005年
- 目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。
- 张晓晶刘云鹏侯科佐王舒宝
- 关键词：BCL-2BAXCASPASE-3凋亡
- EGFR信号通路调节A375细胞侵袭转移分子机制探讨被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨EGFR信号通路对人黑色素瘤A375细胞增殖、粘附和侵袭的影响及其分子机制。方法:用稀释克隆技术筛选EGFR高表达细胞株;采用MTT法检测A375细胞增殖和粘附情况;利用Boyden小室模型检测A375细胞体外侵袭力;WesternBlot法检测P-EGFR和P-AKT蛋白表达;半定量RT-PCR检测MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2mRNA表达。结果:EGF(10ng/ml)作用A375细胞24h时使P-EGFR和P-AKT蛋白表达明显升高,同时A375细胞对Matrigel基质胶的粘附力和体外侵袭力均明显提高(P<0.05),但作用时间达72h时才表现出促细胞增殖作用;AG1478(20!mol/L)和LY290042(10!mol/L)分别封闭EGFR和PI3K活性后均能阻止EGF的作用,并以时间依赖方式抑制A375细胞生长(P<0.01),降低细胞粘附力和体外侵袭力(P<0.01)。EGF具有上调MMP-2,MMP-9和下调TIMP-1,TIMP-2mRNA表达水平作用,而AG1478能下调MMP-2,MMP-9和上调TIMP-1mRNA表达水平,但对TIMP-2mRNA表达改变不明显,结果使MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1mRNA比值均明显下降。结论:EGFR—PI3K/AKT信号通路参与调节黑色素瘤侵袭转移过程,MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1mRNA比值变化可能发挥重要作用。
- 张晓晶徐惠绵刘云鹏王舒宝
- 关键词：表皮生长因子受体粘附基质金属蛋白酶
