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家蝇抗菌肽Attacin-2基因的克隆、序列分析和诱导表达被引量：12: 2011年; 攻击素(attacin)作为昆虫抗菌肽之一,在昆虫的先天免疫中起着重要作用。本研究通过家蝇Musca domesticaEST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇的Attacin-2基因(Mdatta2)cDNA序列。其全长819 bp,包含一个726 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),以及42 bp的5'末端非翻译区(5'UTR)和51 bp的3'末端非翻译区(3'UTR),编码241个氨基酸残基,推导的多肽N端22个氨基酸残基为信号肽序列。同源性分析表明,其氨基酸序列与嗜凤梨果蝇Drosophila ananassae的Attacin一致性最高(46%)。以邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建的系统关系表明,家蝇的Attacin-2与其他双翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先,属于Attain_C超家族。应用实时荧光定量PCR的方法研究家蝇幼虫在受到外源细菌刺激时Mdatta2基因的表达,结果显示,在大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus分别刺激后3 h和6 h,家蝇幼虫Mdatta2表达量出现显著上调。Mdatta2基因在家蝇幼虫体内呈诱导型表达,表达水平随诱导时间的不同而变化,提示Mdatta2基因可能在家蝇免疫防御过程中起着重要作用。; 柳峰松孙玲玲唐婷王丽娜; 关键词：家蝇抗菌肽基因克隆基因表达

家蝇半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因MdCPI的克隆、表达及活性检测: 2010年; 半胱氨酸蛋白酶抑制剂是具有抑制半胱氨酸蛋白酶活性的一类蛋白超家族。本研究根据EST序列信息,通过RACE技术克隆得到1条家蝇Musca domestica半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因MdCPI,该基因含有1个357bp开放阅读框,编码118个氨基酸残基,推导的多肽N端17个氨基酸残基为信号肽序列。同源分析表明,MdCPI氨基酸序列与红尾肉蝇Sarcophaga crassipalpis的CPI相似性最高(identity=51%)。以邻接法(NJ)构建的系统树表明,家蝇与其他双翅目昆虫CPI起源于共同的祖先,属于I25A型蛋白家族。为了解家蝇CPI对半胱氨酸蛋白酶的抑制活性,构建pET-17b-MdCPI表达载体,并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行重组表达。研究发现1μg重组家蝇CPI能够抑制约14μg木瓜蛋白酶的水解活性。结果表明MdCPI确属CPI家族,可能同其他家族成员具有相似的功能,参与免疫及生理调控。这些结果为研究MdCPI在家蝇体内作用机制奠定了基础。; 柳峰松董晓寅张瑞英唐婷; 关键词：家蝇半胱氨酸蛋白酶抑制剂克隆抑制活性

家蝇抗菌肽Diptericin基因的克隆与分析被引量：11: 2009年; Diptericin是抗菌肽家族中的一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用。本研究通过EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的Diptericin基因(Md-Diptericin,MdDpt)cDNA序列,GenBank登录号为FJ794602。其全长410bp,包含一个300bp的完整开放阅读框(ORF),推导的氨基酸序列C端富含甘氨酸,N端富含脯氨酸,同源性分析表明,它与厩蝇Stomoxys calcitrans的Diptericin A mRNA相似性最高(identity=74%)。以邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建的系统关系表明,家蝇Diptericin与其他双翅目昆虫的Diptericin起源于共同的祖先,属于Attain-C超家族(Attacin_C superfamily)。基因定量分析表明,大肠杆菌刺激后6～12h,家蝇幼体MdDpt表达出现明显上调。结果提示MdDpt基因在家蝇免疫防御过程中起着重要作用。; 柳峰松王丽娜唐婷李伟; 关键词：家蝇抗菌肽半定量RT-PCR

家蝇金属硫蛋白基因的克隆、原核表达及活性检测被引量：4: 2010年; 金属硫蛋白是一类普遍存在于生物体内、富含半胱氨酸的小分子蛋白,能螯合多种金属离子。本研究根据EST序列信息,利用RACE技术克隆到1条家蝇Musca domestica金属硫蛋白基因MdMtn(GenBank登录号为GU289398)。序列分析表明,MdMtncDNA全长408bp,包含1个123bp的开放阅读框,编码40个氨基酸残基,其中半胱氨酸残基10个,呈-C-X-C-方式排列。此蛋白理论分子量为3.8kD,等电点为8.78。为了解家蝇金属硫蛋白对重金属的结合活性,构建了pET-DsbA-MT表达载体,并转化Escherichia coliBL21(DE3)宿主菌进行融合表达。研究发现MT重组菌对重金属镉的耐受性得到了明显加强,提示MdMtn基因可能在家蝇适应重金属环境中起到积极作用。; 张迪任国栋唐婷董晓寅柳峰松; 关键词：家蝇金属硫蛋白基因克隆原核表达蛋白活性

中国明对虾ALFFc基因的原核表达与抗血清制备被引量：5: 2010年; 利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术克隆了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗脂多糖因子(ALFFc)基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-ALFFc原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)筛选法获得了1株高表达量重组菌,并通过实验确定其最佳诱导条件为:菌液初始OD6000.7,IPTG终浓度0.8 mmol/L,培养温度37℃,诱导时间3 h.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,为进一步研究ALFFc的功能奠定了基础.; 柳峰松李婷王晓菲唐婷; 关键词：中国明对虾原核表达抗血清

白洋淀和保定市公园原生动物调查及水质分析被引量：2: 2010年; 杨丽坤肖国华赵春龙段明王宏伟; 关键词：水质分析动物调查公园原生动物无脊椎动物生物界

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河北省自然科学基金(C2008000596)