国家自然科学基金(81070629)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 人胰岛素原基因突变导致糖尿病机制的实验研究
- 2014年
- 目的构建几种与人类糖尿病相关的人突变型胰岛素原质粒,并在大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)中进行表达。方法以野生型人胰岛素原质粒基因PCMS-EGFP/HWT为模板,设计并合成引物,利用定点突变技术,PCR生成PCMS-EGFP/H-C(B19)G、H-L(B11)P、H-R(S6)C、H-F(B25)L 4种单点突变质粒,对每个质粒进行序列测定验证定点突变成功,用脂质体2000将上述野生型、4种突变型质粒及空质粒分别转染INS-1细胞,放射免疫法检测各细胞培养液中人胰岛素水平。结果序列测定证实上述质粒定点突变成功,H-C(B19)G、H-L(B11)P、H-R(S6)C 3组突变细胞培养液中胰岛素水平低于野生型和H-F(B25)L组(P<0.05),与空质粒组差异无统计学意义,且3组彼此间差异无统计学意义;H-F(B25)L组与野生型差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建并表达4种突变型人胰岛素原质粒,不同突变型胰岛素原可能通过不同机制导致糖尿病。
- 张红艳崔景秋李宁刘铭冯凭
- 关键词：Β细胞功能衰竭
- 与胰岛素基因突变所致青少年型糖尿病相关的突变型胰岛素原对细胞非折叠蛋白反应信号通路的影响
- 2015年
- 目的观察胰岛素基因突变所致的青少年型糖尿病（MIDY）其突变型胰岛素原对非折叠蛋白反应（UPR）信号通路的影响，探讨错误折叠的胰岛素原导致内质网应激（ESR）、B细胞功能衰竭的分子机制。方法用含有小鼠野生型胰岛素原（正常对照组）和3种突变型胰岛素原cDNA的重组质粒C（A7）Y、G（B8）S、G（C28）R分别转染293T细胞，转染72h后收集细胞分为两组，一组细胞提取总RNA，采用SQRT—PCR法检测剪切型和非剪切型x．盒结合蛋白（XBP-1）mRNA的表达。另一组细胞提取蛋白，采用Western blotting技术检测细胞中真核细胞转录起始因子α（eIF2α）和磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达。采用单因素方差分析及t检验进行统计学分析。结果与正常对照组相比，c（A7）Y组和G（B8）S组剪切型/非剪切型XBP-1mRNA比值均升高，差异均有统计学意义[C（A7）Y组（0．84±0．17），G（B8）S组（0．70±0．16），与正常对照组（0．52±0．16）相比，t=3．17、2．35，均P〈0．01]；G（C28）R组与正常对照组相比差异无统计学意义[G（C28）R组（0．55±0．14），t=0．30，P〉0．05]。计算各组p-elF2α/eIF2α比值，C（A7）Y组和G（B8）S组与正常对照组相比均升高，差异均有统计学意义[正常对照组（0．10±0．01），C（A7）Y组（0．35±0．03），G（B8）S组（0．27±0．02），t=13．57、9．37，均P〈0．01]，G（C28）R组与正常对照组相比差异无统计学意义[G（C28）R组（0．08±0．01），t=1．09，P〉0．05]。结论与MIDY相关的突变型胰岛素原c（A7）Y和G（B8）S可引发细胞UPR和ERS，错误折叠的突变型胰岛素原可能是通过激活IRE1-XBP1和PERK—eIF2α-ATF4信号传导通路来诱发UPR的。
- 孙楠崔景秋宋向欣哈尼克孜冯凭
- 关键词：胰岛素原内质网应激
