国家自然科学基金(30471223)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
- 相关作者：刘伟刘运权闻真珍罗玉容秦耀国更多>>
- 相关机构：华南农业大学四川农业大学中国科学院华南植物园更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 利用SSH分离TDZ诱导金钗石斛成花相关基因被引量：2
- 2013年
- 以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)腋芽为材料,利用抑制消减杂交(SSH)技术构建了TDZ处理后金钗石斛腋芽的正向和反向SSH文库。通过PCR和反向Northern杂交验证后,得到的正向文库的314个阳性克隆和反向文库的59个克隆测序后经过聚类,最终得到39条受TDZ正向调控的EST序列,以及21条受其反向调控的EST序列。对其中某些差异基因进行半定量RT-PCR,结果显示这些基因的表达受TDZ的影响。利用Blastn和Blastx进行比对分析,其中20个没有同源序列,属于未知功能基因。其余序列的同源基因编码的产物参与包括光合作用、合成代谢、转录调控等多种生物学过程。在反向文库中分离到1个MADS-box基因的同源序列和1个Sos同源基因,而正向文库中存在多个反转录转座子,这些结果表明TDZ可以影响开花过程中的某些转录因子和信号基因的表达,进而促进金钗石斛开花。
- 闻真珍张娥刘运权刘伟
- 关键词：金钗石斛开花细胞分裂素反转录转座子
- 仿刺参补体AjC3部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体,为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础。利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556~5110bp),将该片段与原核表达载体pGS-21a连接。将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱纯化后,作为抗原免疫小鼠制备AjC3多克隆抗体。分别用间接ELISA,Western blot检测抗体的效价和特异性。结果显示,PCR扩增得到约555bp的目的片段,重组蛋白分子量大小约56ku;间接ELISA检测抗体效价达1∶25600,Western blot结果显示,多克隆抗体具有良好的特异性。该试验成功的制备了补体AjC3多克隆抗体,为补体AjC3的进一步研究提供了检测工具。
- 张思李明张建清卢亚楠翟钰张峰
- 关键词：仿刺参多克隆抗体原核表达
- 细胞分裂素对金钗石斛开花及其VRN1-like基因表达的影响被引量：3
- 2013年
- 以金钗石斛类原球茎为材料,通过同源克隆分离其VRN1-like同源基因,利用半定量RT-PCR分析细胞分裂素20 mg/L的噻重氮苯基脲(Thidiazuron)对该基因在腋芽和类原球茎中表达的影响.结果表明,喷施TDZ可以代替低温处理诱导金钗石斛开花;金钗石斛VRN1-like基因DnVRNA的cDNA编码的蛋白与高羊茅(Festuca arundinacea)和小麦(Triticum monococcum)中VRN1蛋白的氨基酸序列一致性分别为63%和62%.DnVRNA在腋芽中的表达受TDZ的促进,而在类原球茎中,其表达也受到细胞分裂素和低温的诱导,暗示该基因可能参与细胞分裂素替代低温诱导金钗石斛成花的生物学过程.
- 闻真珍刘运权林首恒林茵刘伟
- 关键词：金钗石斛细胞分裂素开花
- 金钗石斛类原球茎转化子选择方式的比较
- 2008年
- 为确立农杆菌介导法转化金钗石斛类原球茎的适宜的选择体系，利用液体纸基、固体培养基与液体滤纸桥3种培养方式，以0，20，40，50，60，80mg／L质量浓度的潮霉素（Hyg）梯度试验，发现不同培养方式的选择效果有所差异。当使用液体纸基培养在50mg／LHyg的选择压下，20d后可使材料死亡；使用固体培养基时，60mg／L Hyg的选择压下，1个月以上才见效；在40mg／L的选择压下，液体滤纸桥选择需要26—29d。固体培养基选择需要较高的Hyg质量浓度且选择周期长，液体纸基选择可缩短时间，但容易造成转化细胞的生长抑制甚至死亡，比较而言液体滤纸桥是较好的选择方式。
- 罗玉容杨翠芹秦耀国李智斌黎扬辉廖飞雄刘伟
- 关键词：金钗石斛类原球茎
- 基于SPAD值的春石斛假鳞茎成熟度无损判定模型
- 2022年
- 【目的】春化处理诱导开花效果不稳定是春石斛生产中经常出现的现象,其原因是气候差异导致的假鳞茎成熟的具体时间不一致,春化起始时间难于把握。为准确判断春石斛假鳞茎的成熟度,确定春化适宜的起始时间,建立了本模型。【方法】以大龙虾(Dendrobium Hot Lobster)、Dendrobium Sakura Hime和甜心(Dendrobium Lucky Girls‘Sweet heart’)3个春石斛品种为材料,测定不同成熟度春石斛假鳞茎自止叶向下的5个叶位叶片的叶绿素相对含量值(SPAD),通过该5个叶位SPAD值构建的函数关系建立了与假鳞茎成熟度的相关关系模型。以可爱河马(Dendrobium Lovly Hippo)及Dendrobium Sakura Hime 2个春石斛品种为材料,统计了经低温春化后假鳞茎的开花情况,以验证该模型的有效性。【结果】5个叶位叶片的叶的SPAD值之间的函数关系的k值(差异指数)与春石斛假鳞茎的成熟度相关,所构建的模型能够预测不同春化起始时间的春石斛开花情况,可用于春石斛适宜春化起始时间的判断。【结论】本研究提出的基于叶位和SPAD值构建的春石斛假鳞茎成熟度无损判定模型,是一种无损、快速、准确的方法,可提高春石斛生产中盆花的品质,也为春石斛精准调控栽培技术的建立奠定基础。
- 温碧柔蔡雪妍杨逸彭杰良陈方尧闻真珍刘伟
- 关键词：春石斛SPAD值春化作用
- 利用正交设计优化金钗石斛的转化体系被引量：4
- 2009年
- 为优化金钗石斛的转化体系,以其类原球茎(PLBs)为材料,利用正交设计研究了影响农杆菌介导转化的因素.结果表明:PLBs预培养1 d、侵染的菌液OD600值1.2、乙酰丁香酮(AS)100μmol/L、共培养5 d时,每100 mg鲜物质量材料上的GUS染色蓝点数最多;单因子试验表明AS适宜的浓度为50μmol/L;PCR结果显示得到了转化呈阳性的PLBs;初步表明此体系可用于金钗石斛的遗传转化研究.
- 杨翠芹秦耀国罗玉容刘运权黎扬辉刘伟
- 关键词：金钗石斛农杆菌正交设计
- 农杆菌介导的DnMADS2基因转化金钗石斛初步研究被引量：3
- 2013年
- 为建立稳定有效的金钗石斛转化体系,进一步研究花发育相关基因的功能,为石斛兰分子育种提供基础,本研究以金钗石斛类原球茎(PLBs)为转化受体,通过农杆菌介导的方法将DnMADS2基因转入金钗石斛。结果表明:用20 mg/L潮霉素筛选4个月后获得抗性PLBs,对其进行HPT基因和DnMADS2基因的PCR检测表明,目的基因已成功整合到PLBs中。获得的转化PLBs在抗性培养基上分化为不定芽后,再经生根壮苗培养获得转化植株。对转化植株进行Southern检测,结果表明,DnMADS2基因已整合到5株金钗石斛转化植株基因组中。据此建立的稳定高效的金钗石斛转化体系和获得的转基因植株,将为DnMADS2基因功能的进一步研究和金钗石斛转基因育种奠定基础。
- 闻真珍何春梅刘运权刘伟
- 关键词：金钗石斛MADS-BOX
