国家高技术研究发展计划(2011AA090703)
- 作品数：12 被引量：28H指数：4
- 相关作者：孙谧郝建华刘均忠王芳盛军更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所上海海洋大学大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学化学工程更多>>
- 利用Site-Finding PCR克隆琼胶酶基因被引量：4
- 2013年
- 目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了进化树。利用染色体步移技术Site-finding PCR获得目的基因的上下游序列,经过拼接获得全长的目的基因序列,并利用Blast对其进行分析。将目的基因插入pET 24a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用平板水解圈初步鉴定了重组酶的性质,并利用DNS法检测了重组酶发酵上清液的酶活。结果:获得了一株疑似α-琼胶酶产生菌株,16s rDNA序列鉴定显示为Thalassomonas sp.,命名为Thalassomonas sp.LD5。获得了一个新的基因,命名为agaD。agaD开放阅读框长4401 bp,编码1466个氨基酸,理论分子量为158.8kDa。序列分析表明,agaD编码的蛋白AgaD与已有的两种α-琼胶酶的相似性分别为89%和77%。重组AgaD经诱导后可以直接降解琼胶平板产生水解圈,其发酵上清液酶活为0.2 U.ml-1,说明该蛋白为琼胶酶。结论:采用分子克隆技术分离出新的琼胶酶基因,该基因的发现为活性寡糖的制备提供了新的工具。
- 刘丹邢培川于文功路新枝
- 一株海洋过氧化氢酶高产菌的鉴定及产酶条件优化被引量：3
- 2014年
- 对来自青岛近海海域底泥的一株产过氧化氢酶菌株YS0810进行形态学观察、16S rDNA序列同源性分析及生理生化特性的鉴定,在250 ml摇瓶中进行发酵产酶条件优化。初步确定该菌属于不动杆菌属Acinetobacter。发酵培养的最佳碳、氮源分别为蔗糖20 g/L和蛋白胨15 g/L,无机盐MgSO4·7H2O、NaCl、KH2PO4最佳浓度分别为0.9、5.0和1.0 g/L;菌株在培养基起始pH=7.0、4%接种量、50 ml装液量和25℃的条件下发酵24 h获得较高的酶产量。在最佳培养条件下酶产量为2469 U/ml,是优化前的5倍。
- 陈世建王伟孙谧
- 关键词：海洋微生物过氧化氢酶不动杆菌属培养条件优化
- 产酯酶B1海洋枯草芽孢杆菌C5发酵条件优化被引量：4
- 2012年
- 为提高芽孢杆菌C5产酯酶B1的能力,采用响应面法对其发酵条件进行优化.首先通过单因素实验筛选氮源、碳源、接种量、起始发酵pH、装液量、发酵温度和转速这7个因素,当酶活达到最高值时,各单因素的值分别为氮源玉米浆30 mL/L,碳源麦芽糖35 g/L,接种量4%(φ),起始pH 7.0,装液量15 mL,培养温度36℃,转速在实验室现有条件下最高选择220 r/min;再通过Plackett-Burman(PB)设计法,评价了这7个因素对酯酶B1产量影响的大小,确定氮源玉米浆的浓度、发酵起始pH和发酵温度为酯酶产生的3个主要影响因素;利用中心组合设计(CCD)及SAS软件分析获得了主要因素的最优条件,即玉米浆浓度28.70 mL/L,起始发酵pH为7.10,发酵温度为35.8℃.预测最高酶活力为139.18U/mL,实验最终酶活达到138.40 U/mL,与原发酵条件相比提高了228.15%.其实验值与预测值基本相符,说明预测模型可应用于酯酶发酵条件的优化.
- 包兴艳郝建华陈世建王芳王伟孙谧
- 关键词：酯酶PLACKETT-BURMAN响应面法甲基对硫磷
- 海洋假单胞杆菌HW08基因组文库的构建及序列功能分析
- 2012年
- 通过超声波处理HW08基因组,将获得的1～2 KB DNA片段与pUC18质粒进行连接后转化,构建文库。随机筛选200个克隆进行序列测定,快速分析了海洋假单胞杆菌HW08基因组。结果表明:构建了HW08菌株的基因组部分文库,获得序列173个,包含7个载体序列和7个重叠群,其中最长重叠群为重叠群4,包含3段基因序列,分别为Chemotaxis Protein、Hypotheticalprotein和LacI family transcription regulator。重叠群3为DNA修复蛋白,其最大相似性为83%。166个序列中酶类占绝大部分,同时也包含37个新基因。
- 郝建华刘均忠王芳纪晓峰孙谧
- 关键词：基因组文库
- 壳寡糖抗氧化性及对鲫鱼保鲜性能的研究被引量：4
- 2015年
- [目的]研究壳寡糖的抗氧化性及壳寡糖对冷藏鲫鱼保鲜性能的影响。[方法]以壳寡糖为原料,采用邻二氮菲-Fe2+氧化法、DPPH法等对壳寡糖的抗氧化性进行了测定,以p H、TVB-N及TBA为指标研究了壳寡糖对鲫鱼保鲜性能的影响。[结果]研究表明,1.5mg/ml壳寡糖溶液的还原能力相当于50μg/ml阳性对照VC的还原能力;1 mg/ml壳寡糖溶液对羟自由基的清除率为45%,相当于100μg/ml阳性对照VC对羟自由基的清除率;4 mg/ml的壳寡糖溶液对DPPH自由基的清除率达到97.8%。新鲜鲫鱼在4℃冰箱冷藏条件下,壳寡糖溶液涂膜处理组和对照组在第8天时的TVB-N值分别为252.0和196.0 mg/kg;p H分别为7.73和6.69;TBA值分别为1.552和0.670。综合各项指标的变化,壳寡糖涂膜保鲜的鲫鱼货架期明显比对照组长,表明壳寡糖具有较好的抗氧化能力和保鲜性能。[结论]研究可为壳寡糖在更多领域更广泛的开发应用奠定基础。
- 刘敏包静刘均忠孙谧
- 关键词：壳寡糖抗氧化性鲫鱼
- Comparison between thermal hydrolysis and enzymatic proteolysis process for the preparation of tilapia skin collagen hydrolysates
- Purpose:The objective of this study was to compare thermal hydrolysis and enzymatic hydrolysis of tilapia skin...
- Wei WangJunzhong LiuYuejun WangJianhua HaoHongfei ZhengJing BaoMi Sun
- 关键词：HYDROLYSATEPEPTIDES
- 文献传递
- 海洋低温脂肪酶MLP的同源模建及分子动力学模拟被引量：1
- 2013年
- 海洋低温脂肪酶(marine low-temperature lipase,MLP,登录号:ADM47601)是一株海洋细菌来源的新型脂肪酶,其具有耐碱性pH的优点,在生物能源、食品加工等行业具有良好的应用前景。作者从MLP的氨基酸序列入手,利用同源模建方法构建其三级结构,并通过Ramachandran图和Profile_3D图对模型的可靠性进行了验证。同时,通过"界面激活"实验和分子动力学模拟,对覆盖在活性位点区的"盖子域"进行了预测和分析。该研究结果将为今后更高性能突变株的获得及该酶空间折叠方式的研究等提供理论指导。
- 纪晓峰盛军郑媛郝建华孙谧
- 关键词：同源模建分子动力学模拟
- 低温蛋白酶MP发酵液离子交换树脂的脱色被引量：1
- 2014年
- 低温蛋白酶MP发酵液中的色素沉积影响了其在产品中的应用,该文研究了利用离子交换树脂对其进行脱色。实验结果表明,阴离子树脂D352既能有效地脱色,又能保持较高的蛋白酶酶活;D352树脂脱色的最适pH值为6-7,最适温度为30℃,最有效的流速为6 BV/mL;D352树脂在吸附色素的同时也能吸附发酵液中大量杂蛋白分子,蛋白脱除率为45.2%;D352树脂在连续使用6次之后仍具有较强的脱色能力。
- 王芳徐甲坤刘均忠孙谧
- 关键词：蛋白酶发酵液离子交换树脂脱色
- 产脂肪酶海洋酵母Bohaisea-9145批式发酵动力学研究被引量：2
- 2013年
- 以从渤海海域海泥中分离获得一株产脂肪酶海洋酵母Bohaisea-9145为实验菌株,为认识其发酵机理并指导发酵工艺设计,利用批式发酵方法研究该酵母菌体生长和菌体产酶情况。该酵母菌发酵类型为生长非关联型,发酵溶氧浓度最佳为30%±2%,当限制性基质葡萄糖浓度达到2.2772g/L时细胞生长速率最大,通过数学推导和批式发酵结果建立了海洋酵母菌体生长和产脂肪酶动力学模型。
- 郝建华盛军孙谧
- 关键词：海洋酵母脂肪酶发酵动力学
- 氨基硅烷化磁性纳米微球的制备及性能研究被引量：4
- 2013年
- 采用化学共沉淀法合成磁性Fe3O4纳米粒子（Magnetic Nanoparticles，MNP），先后用正硅酸乙酯（TEOS）和3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTEs）对MNP进行表面功能修饰，成功制备了硅烷化磁性纳米粒子（SMNP）和氨基磁性纳米微球（AMNP）。通过透射电镜（TEM）、傅立叶红外变换光谱仪（FTIR）、X-射线衍射仪（XRD）、超导量子干涉仪（SQUID）和热重分析仪（TGA）对合成粒子进行形貌、结构、磁性能和化学组成进行表征。测试结果表明，合成材料平均粒径约为7～10nm，结晶性能良好；3种粒子均具有良好的超顺磁性，MNP、SMNP和AMNP的饱和磁化强度值分别为47．9、38．0和19．5emu／g；氨基含量为5．7％。利用AMNP对牛血清白蛋白（BSA）开展酶的固定化研究，最大吸附量为41mg／g。
- 琚彩霞徐甲坤张权孙谧
- 关键词：磁性纳米粒子
