天津市科技发展战略研究计划项目(043803411)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：马腾骧李胜芝王广有刘秉乾张玥更多>>
- 相关机构：天津市泌尿外科研究所天津医科大学中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目博士研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因在异种移植中的研究被引量：6
- 2005年
- 目的研究转人α1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用。方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化。结果转HT基因的PIECs表面的α1,3半乳糖(αGal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的αGal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上。结论HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用。
- 李胜芝刘秉乾马志方张玥王广有马腾骧
- 关键词：异种移植急性排斥反应脂质体
- 人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶在猪血管内皮细胞的表达及作用
- 2005年
- 目的:探讨人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪血管内皮细胞(PIECs)的表达及意义。方法:将人HT基因重组质粒通过脂质体转染进猪血管内皮细胞,经G418筛选(500mg/L),用流式细胞仪检测HT的表达,表达阳性细胞与人血清共同孵育检测细胞的生存率。结果:流式细胞仪检测结果显示,未经转染HT基因的PIECS的H抗原表达率是13.80%,平均荧光强度很低是32.39,α-Gal表达率是99.98%,平均荧光强度是1347.09;转HT基因的PIECS其H抗原表达率是40.17%B平均荧光强度是143.66,α-Gal表达率是41.15%B平均荧光强度是158.72。转HT基因的细胞在人血清的作用下生存率明显高于未转染的细胞。结论:转染HT基因的PIECs明显提高了H抗原的表达,同时降低了α-Gal的表达,为转基因动物实验探讨克服异种移植超急性排斥反应(HAR)提供理论依据。
- 李胜芝马志方刘秉乾张玥王广有马腾骧
- 关键词：转基因异种抗原
- 包含UI的人衰变加速因子重组基因在转基因鼠高效表达的研究
- 2007年
- 目的建立血管内皮细胞高效表达人衰变加速因子(hDAF)基因的转基因小鼠。方法采用受精卵显微注射法,将包含杂合内含子(UI)的人hDAF导入昆明白小鼠受精卵的雄原核内,然后将注射后仍健康的受精卵植入假孕母鼠输卵管内,待其自然分娩。应用聚合酶链反应(PCR)和Southern杂交检测G_0代小鼠hDAF基因的整合情况,应用流式细胞计数(FCM)检测小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面hDAF的表达,应用逆转录(RT)-PCR检测转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏和肺脏人hDAF基因mRNA的表达。结果注射后卵的存活率和幼鼠出生率分别为83.8% (941/1123)和9.5%(89/941),外源基因的整合率为22.5%(20/89),FCM检测发现其中有7只转基因小鼠PBMCs有人hDAF表达,表达强度为人PBMCs的152%～243%,并且相应小鼠的心、肝、肾及肺组织均有人hDAF mRNA表达。结论UI可以使hDAF在转基因鼠各主要脏器高效表达。
- 张玥王广有李胜芝马腾骧
- 关键词：异种移植衰变加速因子基因表达
- 膜反应性溶解抑制物在细胞及小鼠体内的表达
- 2008年
- 目的观察外源基因在猪血管内皮细胞及小鼠体内表达情况。方法体外培养猪血管内皮细胞，脂质体转染法将pcDNA3-ICAM-2- EnhancerCD59cDNA转染猪的血管内皮细胞，以未转染的猪血管内皮细胞为阴性对照，人血细胞为阳性对照，经G418筛选（浓度为100mg／L）获得具有抗性的克隆，通过流式细胞仪检测转染细胞的表达情况。通过显微注射将CD59基因片段导入小鼠授精卵，对出生的小鼠进行基因检测。结果pcDNA3-ICAM-2-Enhancer-CD59cDNA重组质粒在细胞中表达强度为63．1％；转CD59基因小鼠外周血单核细胞（PBMCs）表达强度为73．38％。结论以人细胞间黏附因子Ⅱ（ICAM-2）为启动子并带增强子的CD59重组基因在猪的血管内皮细胞及小鼠体内均高效特异表达。
- 李胜芝刘秉乾张明王广有马腾骧
- 关键词：内皮细胞转基因启动子
- 联合转移人HT和DAF基因对模拟异种移植超急性排斥反应的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨联合转移人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)和衰变加速因子(DAF)基因对模拟异种移植超急性排斥反应的抑制作用。方法通过显微注射制备转人HT及DAF基因的子代小鼠,以聚合酶链反应和流式细胞仪筛选出人HT和(或)DAF基因整合与表达阳性的子代转基因小鼠。以同时表达人HT和DAF基因的小鼠为实验组,单一表达人HT或DAF基因的小鼠为HT对照组和DAF对照组,取其心脏,采用改良的Langendorff心脏灌注装置灌注心脏,先以KH液逆向灌注,30 min后再以含15%(体积分数)人AB血清的Krebs-Henseleit液(KH液)灌注。记录不同灌注时间的心率、左心室收缩压及左心室舒张末压,计算左心室获得压,以心率与左心室获得压的乘积作为心脏左心室收缩功能的指标,免疫组化法观察灌注后的心脏血管内皮细胞和组织中IgM与C3c的沉积情况。结果KH液灌注过程中,各组间心脏做功能力的差异无统计学意义;KH液中加入人血清后,HT对照组和DAF对照组的心脏做功能力明显下降,在灌注60 min时心脏做功分别为最大值的27%和23%,平均做功时间分别为118 min和89 min,普通小鼠心脏在灌注后50 min时停止搏动,而实验组的心脏做功能力下降缓慢,至60 min时心脏做功维持在最大值的67%以上,平均做功时间为225 min,其心脏做功能力与搏动时间高于HT对照组和DAF对照组(P<0.05)。免疫组化染色显示,实验组小鼠心脏血管内皮细胞与组织中未见IgM和C3c沉积,HT对照组可见C3c少量沉积,DAF对照组可见IgM沉积和C3c少量沉积,普通小鼠心脏可见IgM和C3c沉积。结论小鼠联合转移人HT和DAF基因后,其心脏在人血清灌注下的免疫损伤明显减轻,这可能对抵御异种移植超急性排斥反应有一定帮助。
- 刘秉乾王广有李胜芝张志宏李光三张立霞马腾骧
- 关键词：转基因
- 携带人α1,2-岩藻苷转移酶基因转基因小鼠的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:建立携带人α1,2-岩藻苷转移酶[alpha(1,2)-fucosyltransferase,HT]基因的转基因小鼠模型。方法:采用受精卵显微注射法,将人HT转基因构件导入昆明白小鼠受精卵的雄原核内,然后将注射后仍健康的受精卵植入假孕母管内,等其自然分娩。对G0代小鼠,应用聚合酶链反应(PCR)和Southern杂交检测人HT基因的整合情况、应用逆转录PCR(RT-PCR)检测人HT基因mRNA水平的表达,应用流式细胞计数(FCM)检测H抗原及α-Gal抗原在小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面的表达。结果:注射后卵的存活率和幼鼠出生率分别为84.9%(968/1140)和10.8%(105/968),外源基因的整合率为7.6%(8/105),基因整合阳性小鼠中有7只的心、肝、肾及骨骼肌组织均有人HTmRNA表达,并且PBMCs表面H抗原表达阳性,表达强度为人PBMCs的95%～150%,同时α-Gal抗原表达减少,为正常小鼠的5%～10%。转基因小鼠已经稳定传3代。结论:携带人α1,2-岩藻糖苷转移酶基因的转基因小鼠模型已制备成功。
- 刘秉乾马腾骧王广有李胜芝张玥
- 关键词：基因表达移植物排斥
- 异种移植转基因用含杂合增强子UI的人衰变加速因子重组基因的构建被引量：5
- 2005年
- 目的:构建含杂合增强子UI的人衰变加速因子(DAF)重组基因的表达载体,应用于转基因动物克服异种器官移植排斥反应的研究。方法:ClaI/EcoRI双酶切质粒pXMT2得到UI增强子插入片段(0.3Kb),将其插入pBlue-scriptIISK+克隆载体的相应酶切位点之间;XbaI/BamHI双酶切质粒pGEM-7zf-DAF,得到含人ICAM-2启动子及DAFcDNA序列的插入片段(3.7Kb),将其也插入到pBluescriptIISK+克隆载体的相应酶切位点之间。随后转化细菌,阳性转化菌落质粒抽提及酶切鉴定。设计引物行PCR特异扩增检验。结果:特异性3组酶切重组载体均产生了符合要求的相应条带;PCR扩增出特异的330bp及321bp的片断,符合设计要求。结论:含杂合增强子UI的人衰变加速因子(DAF)重组基因的表达载体构建成功。
- 刘秉乾马志方李胜芝张玥王广有马腾骧
- 关键词：异种器官移植衰变加速因子增强子
