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RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生: 2009年; 目的采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1（Sp1）的表达，观察其对细胞增生的影响。方法构建靶向人Sp1基因的干扰载体（pGenesil-1-Sp1），脂质体介导转染SW620细胞，荧光倒置显微镜下观察转染效率，应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1 mRNA及蛋白质水平的影响，MTT法检测SW620细胞增生活性的改变。结果成功构建针对Sp1的干扰载体，转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达，且在转染48h抑制作用最强，其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68．47％和73．82％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT实验显示，下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力。结论Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生，为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段。; 赵志兰李美宁张悦红杜叶平郝华程牛亮; 关键词：肠肿瘤 RNA干扰 SW620细胞

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达: 2008年; 目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,并经Ni2+-NTA亲和层析纯化,目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确。经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95%。结论已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。; 李美宁冯燕常冰梅解军张悦红殷云勤程牛亮; 关键词：大肠癌 15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达

用基因芯片筛选早期大肠癌相关基因被引量：7: 2008年; 目的用基因芯片技术筛选早期大肠癌相关基因。方法利用HG-U133Plus2.0基因芯片,对大肠腺瘤组织、癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果腺瘤组织与正常组织比较,表达差异2倍以上基因及ESTs共有1892个,其中表达上调的485个,表达下调的1407个。腺瘤组织和癌组织同时与正常组织比较,有602个表达相同的基因及ESTs,其中表达上调2倍以上的125个,表达下调2倍以上的477个。结论602个腺瘤与癌表达相同的基因可能与早期大肠癌的启动和演化有关。; 刘志荣尹云勤李美宁解军程牛亮; 关键词：基因芯片基因表达谱腺瘤大肠癌

PYK-2在PGE_2诱导大肠癌细胞侵袭转移中的作用被引量：1: 2008年; 目的研究富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase2,PYK-2)在前列腺素E2(PGE2)诱导大肠癌SW480细胞侵袭转移中的作用。方法实验分为A、B、C、D四组,分别为未处理组,PGE2组,PGE2+SC19220(EP1抑制剂)组,PGE2+BAPTA-AM(胞内Ca2+螯合剂)组。通过RT-PCR检测SW480中PGE2四种EP(EP1,EP2,EP3,EP4)受体的表达,应用Western blotting检测SW480细胞中PYK-2蛋白的表达,应用Transwell实验观察各组SW480细胞侵袭转移能力的改变。结果SW480表达PGE2的三种EP受体,EP1,EP2和EP4,PGE2可促进EP1的表达;经PGE2作用后,10分钟内PYK-2磷酸化水平逐渐增加,0分钟、5分钟、10分钟检测结果相比差异均有统计学意义(P<0.05),30分钟与0分钟检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组与B组相比PYK-2磷酸化水平明显下降(P<0.05),大肠癌细胞侵袭转移能力显著降低(P<0.05)。结论PGE2可能通过Ca2+,EP1促进PYK-2的磷酸化,从而进一步诱导大肠癌细胞的侵袭转移过程。; 兰小琴王莹李美宁张悦红解军程牛亮; 关键词：大肠癌 PGE2

前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定: 2008年; 15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。; 李美宁解军常冰梅张悦红殷云勤程牛亮; 关键词：大肠癌 15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达

靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用被引量：2: 2009年; 目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。; 郝华李美宁赵志兰杜叶平秦立元程牛亮; 关键词：RNA干扰短发夹RNA 大肠癌

利用基因芯片筛选大肠癌中细胞增殖相关基因: 2008年; 目的用基因芯片技术筛选大肠癌中细胞增殖相关基因。方法利用HG-U133Plus2.0基因芯片,对大肠癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果①癌组织与正常组织比较,表达差异2倍以上基因共有1200个,其中表达上调的474个,表达下调的726个。②在1200个基因中,共有127个基因与细胞的增殖功能相关,其中表达上调的66个,表达下调的61个。结论127个细胞增殖相关基因可为大肠癌的基因治疗提供靶点。; 刘志荣李美宁王惠珍张悦红牛勃程牛亮; 关键词：基因芯片大肠肿瘤细胞增殖相关基因

PGDH基因甲基化状态与散发性结直肠癌的相关性研究: 2008年; [目的]探讨15-羟基前列腺素脱氢酶(15-hydroxyproglandin dehydrogenase,PGDH)基因甲基化状态与散发性结直肠癌发生发展的关系。[方法]利用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测散发性结直肠癌及相对应的癌旁组织中PGDH基因甲基化状态。[结果]PGDH基因在散发性结直肠癌中甲基化率为37.5%(10/32),有6例癌及癌旁组织都发生了甲基化;伴有淋巴结及远处转移的甲基化率为50%(7/14),高于无转移的甲基化率16.7%(3/18)(P﹤0.05)。[结论]PGDH基因高甲基化是散发性结直肠癌中常见的分子改变之一,结直肠癌中PGDH基因高甲基化可能发生在癌变早期并与结直肠癌的恶性进展具有相关性。; 李美宁常冰梅解军张悦红王全红梁小波程牛亮; 关键词：散发性结直肠癌 DNA甲基化

前列腺素E2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响被引量：3: 2008年; 目的研究前列腺素E2(PGE2)对结肠癌SW480细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法分别使用外源性PGE2及其受体EP1的拮抗剂SC19220作用于SW480细胞后,MTr法测定肿瘤细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,RT-PCR及Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白水平的改变.结果外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,PGE2作用于细胞后,黏附细胞A值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞由6.33±0.33增加至43.33±0.88,侵袭细胞由3.67±0.34增加至26.33±0.89,差异均有统计学意义(P＜0.05).SC19220可抑制PGE2所诱导的SW480细胞黏附、迁移及侵袭,PGE2+SC19220组与PGE2组相比,黏附细胞A值由0.417±0.088下降至0.140±0.006,迁移细胞由43.33±0.88下降至28.00±0.58,侵袭细胞由26.33±0.89下降至5.67±0.33,差异均有统计学差异(P＜0.05).RT-PCR及Western blotting检测结果显示,PGE2作用后SW480细胞VEGFmRNA及蛋白水平表达增强,且表达量与PGE2浓度呈正相关.结论 PGE2可显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,其作用过程可能与VEGF表达上调相关.; 兰小琴王莹李美宁张悦红梁小波程牛亮; 关键词：地诺前列酮结肠肿瘤 SW480细胞

紫杉醇联合顺铂、氟尿嘧啶治疗晚期胃癌35例临床分析被引量：2: 2008年; 目的研究紫杉醇联合顺铂、氟尿嘧啶方案(PCF)治疗晚期胃癌的疗效及安全性。方法回顾性分析2002年11月～2006年11月北京协和医院肿瘤内科收治的使用PCF方案化疗的所有晚期胃癌患者,共35例。化疗方案:紫杉醇(PTX)150mg/m2,静滴3h,第1天给药;顺铂(DDP)12mg/m2,静脉滴注,第1～5天;氟尿嘧啶(5-Fu)3000mg/m2,持续静脉输注120h;每21天为1周期。分别化疗2～6周期后按RECIST标准评价疗效,按NCI-CTC标准评价毒副反应。结果15例局部晚期胃癌患者,术后PCF辅助化疗,中位无进展生存时间(PFS)11.0月,中位总生存时间(OS)18.6月。20例远处转移胃癌患者,15例可评估,完全缓解0例(0),部分缓解3例(20%),疾病稳定9例(60%),疾病进展3例(20%)。中位疾病进展时间(TTP)为7.0月,中位总生存时间(OS)9.0月。3/4度不良反应主要是恶心(18.1%),中性粒细胞减少(9.4%)和乏力(7.9%)。9.5%的患者出现中性粒细胞减少性发热。结论PCF方案的不良反应可以耐受,疗效值得进一步研究。; 赵林宁晓红李孝远陈书长; 关键词：晚期胃癌紫杉醇顺铂氟尿嘧啶

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山西省科技攻关计划项目(2006031087-02)

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