上海市卫生局科技发展基金(2008179)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 增生性玻璃体视网膜病变动物模型的改进和评价被引量：2
- 2011年
- 增生性玻璃体视网膜病变是导致视网膜脱离手术失败的主要原因,建立动物模型能更好的研究其发病机理,从而进行防治。本文就PVR动物模型的所用动物、模型的建立方法以及评价和分级进行综述。
- 赵红梅盛敏杰于靖
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变
- 激肽原1作为增生性玻璃体视网膜病变血清分子标志物的验证
- 2009年
- 目的验证激肽原1是否可以作为增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的血清分子标志物。方法收集PVR患者A、B、C、D级玻璃体(n=8)和相应的PVR患者术前和术后6个月血清样本(n=20),正常捐献眼玻璃体样本(n=8)和健康体检者血清(n=20)做正常对照,PVR术后不同状态的血清样本,包括环扎术后未愈者(n=8)和硅油眼(n=8)。对玻璃体和相应的血清样本分别进行激肽原1的蛋白质印迹法(Western blotting)分析和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。结果Western blotting分析显示激肽原1在PVR患者玻璃体和血清中均可检测到,而在正常捐献眼和正常人的血清中未检测到,且在PVR C、D级中明显高于PVR B级。激肽原1可以在所有的PVR患者玻璃体和血清样本中检测到(24/24,100%)。ELISA显示严重PVR(C、D级合并)患者激肽原1浓度玻璃体中为(281.0±63.0)μg·L-1,血清中为(499.8±153.8)μg·L-1,明显高于轻度PVR(A、B级合并)患者[玻璃体:(237.5±32.1)μg·L-1,血清:(402.8±85.5)μg·L-1],二者差异有统计学意义(P<0.05)。PVR患者术后6个月血清中激肽原1明显下降至(81.9±18.6)μg.L-1(P<0.05),仍高于正常对照组(57.9±8.9)μg.L-1(P<0.05)。但环扎术后未愈者血清中激肽原1浓度(116.8±45.1)μg·L-1明显高于正常对照组和硅油眼(51.6±14.1)μg·L-1(P<0.01),亦高于玻璃体切割术后6个月PVR患者(P<0.05)。结论激肽原1是PVR患者玻璃体和血清的特异蛋白质,且与PVR的严重程度和预后评估相关,显示了作为PVR血清分子标志物的可能性。
- 于靖王方
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变分子标志物蛋白质组学
- 激肽原-激肽系统参与增生性玻璃体视网膜病变形成的实验研究被引量：3
- 2011年
- 背景前期研究发现，激肽原1是增生性玻璃体视网膜病变（PVR）患者玻璃体中的特异蛋白质，是在质谱鉴定中得到的肽段匹配和MASCOT得分最高的蛋白质，且与PVR的严重程度呈正相关。目的探讨激肽原一激肽系统（KKS）是否参与PVR的发生过程。方法大鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞系RPE-J细胞复苏培养后用PBS配制成2．5X10^8／ml的细胞悬液，大鼠下腔静脉采血4ml经枸橼酸二钠处理和离心后用PBS制备成血小板密度为2．5×10^8／ml的血浆。用随机数字表法将60只Wistar大鼠随机分为实验组和生理盐水组，每组各30只。实验组大鼠左眼玻璃体腔内注射RPE细胞悬液4ill＋富含血小板血浆6仙l建立PVR模型，生理盐水组左眼玻璃体腔以同样的方法注射生理盐水10μl，各组大鼠的右眼作为自身对照组。术后1、3、7、14、21、28d行裂隙灯及间接检眼镜检查，按Francine的标准进行PVR分级。玻璃体腔注射后28d收集实验动物的玻璃体、血清和视网膜标本，应用Westernblot法检测缓激肽的表达，视网膜标本行组织病理学检查。结果术后28d，实验组有25只眼出现不同程度的PVR表现，建模成功率为89．3％（25／28）。术后7、14、28d裂隙灯下证实实验组大鼠形成1、2、3级PVR。视网膜组织病理学检查表明视网膜组织中炎性细胞浸润及RPE细胞移行并转化为成纤维细胞，出现视网膜脱离。Westernblot分析显示在所有PVR大鼠血清、玻璃体和视网膜中均可检测到缓激肽的表达，但实验组大鼠的表达强度明显高于生理盐水组大鼠。结论玻璃体腔注射RPE细胞联合富含血小板血浆的方法可以成功建立PVR大鼠模型，KKS可能参与PvR的发生。
- 赵红梅于靖盛敏杰王克生
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变视网膜色素上皮细胞富含血小板血浆
- 胰岛素样生长因子结合蛋白-6在增生性玻璃体视网膜病变大鼠玻璃体和血清中的表达被引量：2
- 2013年
- 背景增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是导致视网膜脱离复位手术失败的主要原因之一。PVR玻璃体蛋白质组学研究发现，胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）是PVR患者玻璃体和血清中的特异蛋白质，且其在严重PVR患者中的含量明显高于轻度PVR。目的探讨IGFBP-6在PVR大鼠模型中的表达变化。方法选取7周龄SPF级雄性Wistar大鼠70只，采用抛硬币法随机将动物分为PVR模型组34只和对照组36只。PVR模型组大鼠左眼玻璃体腔内注入透明质酸酶1U（商品单位），注射后10min待玻璃体液化后，玻璃体腔内再注入1×106视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液5μl和1×107富含血小板的血浆5μl；对照组大鼠以同样的方法注射无菌生理盐水10μl。各组大鼠玻璃体腔注射后1、2、3、4周行眼底检查并按Francine标准对PVR进行分级。分别于造模后1、2、4、8周处死各组大鼠，抽取动物心脏血，切取肝脏和视网膜，并制备切片，采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏组织和视网膜组织中IGFBP-6mRNA的表达，采用ELISA法检测大鼠玻璃体和血清中IGFBP-6的质量浓度，对各组大鼠的测量指标进行比较。结果利用实时荧光定量PCR法分别从肝脏和视网膜中提取高纯度的IGFBP-6mRNA。PVR模型组大鼠造模后第4周视网膜中IGFBP-6mRNA含量为（3．79±1．33）×10-4，明显低于对照组的（8．32±2．96）×10-4，差异有统计学意义（t=3．420，P〈0．01）；PVR模型组大鼠造模后第4周视网膜中IGFBP-6mRNA含量明显低于造模后第1、2、8周，差异均有统计学意义（P〈0．05），而PVR模型组大鼠造模后各时间点肝脏中IGFBP-6mRNA含量与对照组比较以及PVR模型组大鼠组内各时间点间的比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。PVR1、2、3级组大鼠视网膜中IGFBP-6mRNA含量明显低于对照组，差异有统计学意义（P〉0．05），但不同等级的PVR大鼠间差异无�
- 于靖崔尘赵红梅王克生
- 关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白增生性玻璃体视网膜病变视网膜
- 类胰岛素生长因子结合蛋白-6作为PVR血清分子标志物的验证被引量：2
- 2009年
- 目的验证类胰岛素生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)是否可以作为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的血清分子标志物。方法收集PVRA、B、C、D级玻璃体(n=8)及术前术后6个月血清样本(n=20),PVR C级以上为严重PVR。正常供体眼玻璃体样本(n=8)和健康体检者血清(n=20)作为正常对照,对玻璃体和相应的血清样本分别进行IGFBP-6的免疫印迹分析和酶联免疫吸附试验(ELISA)。环扎术后未愈者(n=8)和硅油眼(n=8)患者的血清样本进行ELISA分析。在临床研究中的个体使用方面符合赫尔辛基宣言,参与试验者签署知情同意书。结果22例PVR患者(总体24例)玻璃体和血清中可检测到IGFBP-6,而供体眼玻璃体和正常人的血清中未测到。PVRC级、D级中IGFBP-6条带明显强于PVR B级。ELISA结果显示严重PVR患者玻璃体和血清中IGFBP-6质量浓度明显高于轻度PVR(F=3.34,P=0.04)。PVR患者术后6个月血清中IGFBP-6由(185.3±34.9)pg/mL明显下降至(65.4±31.8)pg/mL(t=11.10,P=0.015),与玻璃体术后硅油眼和正常对照组的血清中的质量浓度接近(t=0.08,P=0.989;t=1.59,P=0.131),但明显低于环扎术后未愈组(t=3.16,P=0.009)。结论IGFBP-6是PVR患者玻璃体和血清的特异蛋白质,与PVR的严重程度和预后评估相关,可作为PVR血清分子标志物。
- 于靖王方
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变分子标志物蛋白质组
- 胰岛素样生长因子结合蛋白-6对RPE细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)对视网膜色素上皮(retinal pigmented epithelium,RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法用IGF-Ⅱ(50mg·L-1)、PDGF(20mg·L-1)、VEGF(40mg·L-1)和TGF-β(4mg·L-1)干预ARPE-19细胞6h,以诱导细胞增殖,再加入不同浓度IGFBP-6(1mg·L-1、10mg·L-1、100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)作用24h、48h后,通过MTS实验观察OD值的变化,研究IGFBP-6对细胞增殖的影响。细胞划痕实验分为IGF-Ⅱ组(50mg·L-1)、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组(含IGF-Ⅱ50mg·L-1和IGFBP-6500mg·L-1)、无血清培养液组的实验,细胞划痕24h、48h后,计算各组细胞移行愈合率的变化,从而研究IGFBP-6对细胞迁移的影响。结果 MTS比色法显示一定浓度的IGFBP-6(100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)可以抑制IGF-Ⅱ诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05),各浓度IGFBP-6对PDGF、VEGF、TGF-β诱导的细胞增殖均无明显影响(均为P>0.05);细胞划痕实验显示,IGF-Ⅱ组、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组、无血清培养液组的细胞移行愈合率[分别为(24h:43.91%±3.85%、29.76%±2.49%、26.12%±2.33%;48h:66.09%±1.67%、59.88%±3.43%、57.05%±2.49%)]差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IGFBP-6能够抑制IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞增殖和迁移。
- 赵红梅于靖盛敏杰陈轶卉
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变视网膜色素上皮细胞增殖迁移
