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RANTES和Eotaxin-3基因单核苷酸多态性与儿童哮喘的关系被引量：4: 2010年; 目的研究趋化因子激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)基因C-28G(RANTES C-28G)、RANTES A-403G及嗜酸性粒细胞趋化蛋白(Eotaxin-3)基因C+77T(Eotaxin-3 C+77T)的单核苷酸多态性(SNP)与汉族儿童哮喘的关系。方法采集192例3～12岁汉族哮喘患儿(哮喘组)的口腔颊黏膜拭子,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对RANTES C-28G、RANTES A-403G和Eotaxin-3 C+77T的SNP位点进行检测,以与哮喘组患儿无血缘关系的192名健康志愿者(18～22岁)作为正常对照组。分析两组基因型及等位基因频率分布情况。结果两组间RANTES C-28G和RANTES A-403G两个SNP位点的基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组间Eotaxin-3 C+77T基因型分布比较,差异有统计学意义;哮喘组Eotaxin-3 C+77T T/T纯合子基因型频率为32.3%,明显高于正常对照组的12.5%(OR=3.44,P=0.000)。结论Eotaxin-3 C+77T可能是汉族儿童哮喘易感SNP位点,其中Eotaxin-3 C+77T T/T纯合子基因型与哮喘发病密切相关。; 霍婧刘全华华丽鲍一笑; 关键词：嗜酸性粒细胞趋化蛋白单核苷酸多态性哮喘儿童汉族

野生型和突变型人白介素13哺乳细胞表达质粒的构建: 2011年; 目的:构建野生型及突变型人IL-13(hIL-13)哺乳细胞表达质粒。方法:采用融合PCR扩增人生长激素(hGH)-hIL13融合蛋白编码序列。PCR产物和pcDNA3.1表达载体经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切处理后,将PCR产物定向插入pcDNA3.1真核表达载体中,构建质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g。将其转化到DH5α感受态细胞内进行扩增,阳性克隆鉴定,质粒抽提,进行测序验证。结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g经测序验证,hGH-hIL13融合蛋白编码序列与实验设计一致,且已与pcDNA3.1(+)真核表达载体正确重组。结论:成功构建了哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g,为后续野生型及突变型hIL-13哺乳细胞的重组表达奠定了基础。; 储毅刘全华华丽朱亚菊高苗苗鲍一笑; 关键词：表达质粒哺乳细胞

IgE高亲和力受体与哮喘的研究进展: 2011年; 儿童哮喘是Ⅰ型变态反应性疾病,IgE在其发病过程中具有极其重要的作用.IgE与其高亲和力受体（FcεR Ⅰ）结合,可以引起肥大细胞的脱颗粒、白三烯的合成和细胞因子的分泌,进而引起气道慢性炎症和气道平滑肌痉挛.目前的研究认为Src激酶家族对FeeR Ⅰ信号传导途径有重要作用.该文综述了关于FcεR Ⅰ的表达调节、信号传导、FcεR Ⅰ与哮喘发病之间的关系及如何应用FcεR εⅠ进行哮喘诊断和治疗.; 储毅鲍一笑; 关键词：IGE SRC激酶肥大细胞儿童哮喘

野生型和突变型人白介素13的大肠杆菌表达及活性分析: 2010年; 利用大肠杆菌表达野生型和突变型重组人白介素13(IL-13),以获得具有生物学活性的重组蛋白。采用PCR方法从质粒pET22b-hIL-13上扩增人成熟IL-13的编码序列。用定点突变引物扩增IL-13突变体(IL-13m)编码基因。将IL-13和IL-13m编码基因分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建质粒pET28a(+)-IL-13和pET28a(+)-IL-13m,然后将质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,构建重组体,IPTG诱导重组蛋白表达。重组蛋白采用镍柱(Ni-NTA)纯化,纯化后复性,并分析其生物学活性。结果成功得到IL-13和IL-13m重组蛋白,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约14.6 kD的位置出现明显蛋白条带,经Western blot证实为重组hIL-13蛋白;重组蛋白主要以包涵体形式存在。纯化复性后,重组蛋白具有生物学活性。最后成功获得了具有生物学活性的野生型和突变型重组人IL-13,为后续研究奠定了基础。; 刘全华华丽霍婧鲍一笑; 关键词：大肠杆菌活性分析

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