辽宁省自然科学基金(2013022010)
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 相关作者：张凤香李晨光贺成业李莹罗俊生更多>>
- 相关机构：辽宁医学院附属第一医院辽宁医学院附属第三医院辽宁医学院更多>>
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- 钙敏感受体对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制研究
- 2014年
- 目的:研究钙敏感受体(CaR)在巨噬细胞中的表达情况及对巨噬细胞转化为泡沫细胞的影响。方法 :通过免疫荧光和蛋白印迹(Western Blot)检测巨噬细胞中CaR的表达情况;氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)100 mg/L作用48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞;实验分组为CaR激动剂组、CaR抑制剂组、空白对照组,分别作用泡沫细胞48 h:采用油红O染色检测阳性细胞数量;高效液相色谱观察细胞内胆固醇代谢情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中炎性因子的分泌情况;Western blot检测细胞内CD36和胆固醇酰基转移酶(ACAT-1)蛋白的表达情况。结果 :Western blot和免疫荧光结果显示在巨噬细胞中存在CaR的表达。油红O染色和高效液相色谱检测泡沫细胞的结果显示:与空白对照组比较,CaR激动剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显下降(P<0.05),而CaR抑制剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显升高(P<0.05);ELISA检测结果显示:与空白对照组比较,CaR激动剂组促炎因子肿瘤坏死因子-(TNF-a)、巨噬细胞游走抑制因子(MIF)含量明显降低(P<0.05),抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)含量明显升高(P<0.05),而CaR抑制剂组促炎因子TNF-a、MIF含量明显升高(P<0.05),抗炎因子IL-10含量明显降低(P<0.05);Western blot检测各组泡沫细胞结果发现:与空白对照组比较,CaR激动剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显下降,而CaR抑制剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显升高。结论 :在巨噬细胞中存在CaR的表达,并且高表达的CaR可以抑制巨噬细胞泡沫化的形成。
- 于晓东李莹张凤香
- 关键词：钙敏感受体巨噬细胞CD36胆固醇酰基转移酶
- 转化生长因子-β1对巨噬细胞内胆固醇酯水解酶表达的影响
- 2015年
- 目的探讨转化生长因子(TGF)-β1对巨噬细胞内胆固醇酯水解酶(CEH)表达的影响。方法通过Ad-TGF-β1转染巨噬细胞,作用24、48、72 h后,采用Realtime-PCR、Q-PCR和Western印迹法检测TGF-β1和CEH的表达情况;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)观察巨噬细胞CEH的分泌情况。结果作用24、48、72 h后,随着Ad-TGF-β1作用时间的延长CEH mRNA表达水平明显增强;CEH和TGF-β1蛋白相对灰度值分别为3.01±0.02、5.43±0.11、8.95±0.31和6.43±0.72、10.15±1.63、15.02±2.24;细胞上清液中CEH的含量分别为(32±3.15)、(51±4.33)、(73±3.83)ng/ml。结论 TGF-β1能够诱导巨噬细胞CEH的表达,并且两者之间存在明显的时间效应关系。
- 张凤香关宁李晨光罗俊生
- 关键词：巨噬细胞
- TGF-β1/Smad7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶表达中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨TGF-β1/Smad-7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达中的作用。方法用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW 264.7转化为泡沫细胞,将经泡沫化处理的巨噬细胞进行2次分组,第1次分为正常对照组、白藜芦醇组、LY2157299组和白藜芦醇+LY2157299组,第2次分为正常对照组、白藜芦醇组、Ad-Smad-7组和白藜芦醇+Ad-Smad-7组,均处理48 h,通过胆固醇流出试验检测各组巨噬细胞内胆固醇流出率,油红O染色检测细胞泡沫化情况,RT-PCR法和Western blot法检测细胞中p-Smad-7和CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,白藜芦醇组巨噬细胞内胆固醇流出率明显升高(P<0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组胆固醇流出率均明显降低(P<0.05);白藜芦醇组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P<0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组巨噬细胞泡沫化程度明显增强(P<0.05);白藜芦醇组巨噬细胞中CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显增强(P<0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显下降(P<0.05),而白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组CEH基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显被抑制(P<0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显增强(P<0.05)。结论白藜芦醇可能是通过TGF-β1/Smad-7信号通路来增强CEH的表达。
- 张凤香贺成业李晨光司忠义
- 关键词：白藜芦醇转化生长因子-Β1
- 钙敏感受体对内皮祖细胞数量及功能的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察钙敏感受体(Ca SR)对人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法培养并鉴定EPCs;RT-PCR和Western印迹检测EPCs中Ca SR的表达情况;MTT法观察Ca SR对EPCs增殖能力的影响;Tube形成和迁移实验评价Ca SR对EPCs血管新生能力和迁移能力的影响;Western印迹检测Ca SR对EPCs中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果 RT-PCR和Western印迹结果显示在EPCs中有Ca SR的表达;MTT法、Tube形成和迁移实验检测结果显示与正常对照组相比较,Ca SR激动剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显增强(P<0.05),而Ca SR抑制剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显降低(P<0.05);Western印迹检测发现与正常对照组相比较,Ca SR激动剂组VEGF和Ca SR表达明显增强,而Ca SR抑制剂组VEGF和Ca SR表达明显降低。结论 EPCs中有Ca SR的表达,并且Ca SR可以影响EPCs的数量、迁徙和血管形成能力。
- 张凤香贺成业李晨光孙大鹏
- 关键词：钙敏感受体内皮祖细胞血管内皮生长因子
- 大蒜素对人外周血内皮祖细胞增殖活力及迁移能力的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨大蒜素(allicin)对人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖活力及迁移能力的影响。方法提取健康成人EPCs,经DiI-acLDL和FITC-UEA-I染色后,于激光共聚焦显微镜下观察染色结果;向EPCs加入5、10、15和20μg/ml的大蒜素,分别作用12、24、48和72 h,MTT法检测各组EPCs的增殖活力;Transwell小室试验及Western blot法分别检测大蒜素作用48 h后,其对各组EPCs迁移能力及EPCs中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质细胞衍生因子-1(stromal cells derived factor-1,SDF-1)蛋白表达水平的影响。结果 DiI-acLDL染色可见绿色荧光,FITC-UEA-I染色可见红色荧光,双重染色可见黄色荧光。作用12、24和48 h的10、15和20μg/ml大蒜素组EPCs的增殖活力显著高于空白对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性,于48 h时达最高;10、15和20μg/ml大蒜素组EPCs的迁移能力及EPCs中VEGF和SDF-1蛋白的表达水平均明显高于空白对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论大蒜素可提高人EPCs的增殖活力及迁移能力,该作用可能是通过调节VEGF和SDF-1的表达而实现的,为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的防治提供了新的思路。
- 张凤香贺成业李晨光郭闻师
- 关键词：大蒜素内皮祖细胞细胞迁移血管内皮生长因子基质细胞衍生因子-1
- 转化生长因子-β1对巨噬细胞泡沫化过程的影响及其机制被引量：1
- 2015年
- 目的研究转化生长因子(TGF)-β1是否能通过胆固醇酯水解酶(CEH)对巨噬细胞的泡沫化过程产生影响。方法 ox-LDL(100 mg/L)作用48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞;Ad-TGF-β1和(或)siRNA CEH作用于巨噬细胞,作用48 h后,分别采用油红O染色检测阳性细胞数量;HPLC观察巨噬细胞内胆固醇代谢情况;Western印迹检测巨噬细胞内CD36和SR-A1蛋白的表达情况。结果油红O染色阳性细胞数量:空白对照组59.54±4.01、Ad-TGF-β1组15.12±1.23、Ad-TGF-β1+siRNA CEH组89.01±3.67、siRNA CEH组94.28±5.22。巨噬细胞内胆固醇酯(CE)、游离胆固醇(FC)和总胆固醇(TC)含量;与空白对照组比较,Ad-TGF-β1+siRNA CEH组和siRNA CEH组均增加(P<0.05);而Ad-TGF-β1组均明显下降(P<0.05)。Western印迹法检测发现:与空白对照组比较,Ad-TGF-β1组CD36和SR-A1蛋白表达均明显低于;而Ad-TGF-β1+siRNA CEH组和siRNA CEH组CD36和SR-A1蛋白表达明显增强。结论 TGF-β1是通过提高CEH的表达来抑制巨噬细胞向泡沫细胞转化。
- 张凤香贺成业李晨光罗俊生
- 关键词：转化生长因子-Β1CD36
