国家自然科学基金(81370449)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 葛根素对HIE新生大鼠神经及PI3KAkt信号通路的作用机制研究被引量：4
- 2017年
- 目的观察葛根素对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠的神经保护作用,分析神经保护作用是否涉及PI3K/Akt信号通路的参与以及可能的机制。方法 90只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组(n=10)、HIE组(n=40)及葛根素疗组(n=40),后两组又进一步分为3 h、6 h、12 h、24 h 4个时间点,每个时间点10只。参照Rice等和吴婉芳法,建立新生大鼠HIE模型。HE染色观察各组大鼠神经元形态变化,免疫组织化学法检测磷酸化Akt的表达。依据免疫组化的结果采用Western blot方法进一步检测PI3K/Akt信号通路表达。结果 90只Wistar大鼠模型全部成功,全部纳入结果分析。HE染色示葛根素治疗组大鼠大脑皮层和海马区神经细胞坏死率较HIE组明显减少。免疫组化结果示:随着时间的延长,葛根素治疗组磷酸化Akt蛋白阳性率较HIE组显著上调(P<0.01)。HIE组磷酸化Akt在12 h时达到高峰,但葛根素治疗组在24 h时达到高峰;在每组每个时间点葛根素组磷酸化Akt蛋白的阳性表达均高于HIE组(P<0.01)。假手术组亦有极少量表达。Western blot结果示:在各个时间点内,各组总Akt的表达一致;但磷酸化Akt的表达(Ser473和Thr308)在葛根素治疗组明显强于HIE组;且随着时间变化,其表达于上述免疫组化的检测大致一致。葛根素显著提高磷酸化Akt的水平,既可作用于Ser473磷酸化位点,也可作用于Thr308磷酸化位点。结论葛根素对HIE大鼠具有神经保护作用。葛根素可激活PI3K/Akt通路来发挥其对HIE新生大鼠神经元的保护作用,其机制可能与上调磷酸化Akt(Ser473)、磷酸化Akt(Thr308)表达水平,增加Akt磷酸化水平的表达有关。
- 范少平丁文学梁碧先
- 关键词：葛根素新生大鼠
- 血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响
- 目的探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础。方...
- 覃乙芯吴卓敏徐茜廖文婕贺帅岑柏宏廖路敏王震季爱民
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞原代培养血清饥饿细胞周期
- 血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响
- 目的探讨人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础。方...
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- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞原代培养血清饥饿细胞周期
- 文献传递
- siRNA介导的PD-L1沉默可增强人CD8~＋T淋巴细胞的体外杀伤作用被引量：1
- 2018年
- 目的设计并筛选多条可高效特异性降低肿瘤细胞表面沉默程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并研究其增强人CD8^+T淋巴细胞对人胶质瘤细胞(U87 MG)免疫杀伤作用。方法根据siRNA设计法则,并通过siDirect软件在线设计针对PD-L1基因的几种不同的siRNA序列,并运用BLAST进行同源性分析,最终确定候选序列;通过RT-qPCR、Western blot及流式细胞术实验,选出高效抑制PD-L1 mRNA及蛋白表达的siRNA序列;通过流式细胞术及CCK8检测PD-L1siRNA沉默U87 MG细胞的PD-L1后,人CD8^+T细胞对U87 MG的细胞凋亡及增殖的影响。结果设计了10条针对人PD-L1基因具有不同核苷酸序列的siRNA。采用RT-qPCR、Western blot及流式细胞术在mRNA及蛋白水平上检测siRNA的沉默效率,与对照组相比,siPD-L1-1、siPD-L1-2、siPD-L1-3、siPD-L1-4、siPD-L1-5及siPD-L1-8均显著降低U87 MG中PD-L1基因的表达(P<0.05),其中siPD-L1-3的沉默效率最高。与对照组相比,流式细胞术及CCK8结果显示,siPD-L1-3及siPD-L1-8均可显著增强人CD8^+T细胞对U87 MG细胞的杀伤作用,且该杀伤作用可显著抑制U87 MG细胞增殖(P<0.05)。结论本文设计并筛选了能有效沉默PD-L1基因表达的siPD-L1-1、siPD-L1-2、siPD-L1-3、siPD-L1-4、siPD-L1-5及siPD-L1-8的6条序列,其中siPD-L1-3和siPD-L1-8可高效增强T淋巴细胞对U87 MG细胞免疫杀伤作用,且siPD-L1-3的作用最为显著。本文设计的PD-L1siRNA分子可以用于设计和制备预防、治疗多种癌症的核酸药物。
- 王震黄文岑柏宏岑柏宏廖路敏黎国仙季爱民
- 关键词：神经胶质瘤细胞CD8+T细胞
- 血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础。方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min,收集细胞并用内皮细胞专用培养基(含5%内皮细胞基础培养基、1%内皮细胞生长因子、1%青链霉素),置37℃,5%CO2培养箱培养。在倒置显微镜下观察细胞形态特点,并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度,并检测0%、0.1%、0.5%、1%血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24 h对细胞周期的影响。结果 0.1%Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs,细胞培养呈典型的铺卵石状排列,细胞较密处呈涡旋状排列。免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性。流式检测细胞纯度高达99.67%。不同血清浓度培养基培养6 h可获得70%左右的G0/G1期细胞;培养12 h可获得80%~90%的G0/G1期细胞;培养18、24 h可获得95%左右的G0/G1期细胞。结论 0.1%Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs。完全无血清培养基培养12 h即可获得纯度超过80%的G0/G1期HUVECs。
- 覃乙芯吴卓敏徐茜廖文婕贺帅岑柏宏廖路敏王震季爱民
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞原代培养血清饥饿细胞周期
- α-硫辛酸对大鼠胶质瘤细胞缺氧复氧的保护作用
- 2014年
- 目的研究α-硫辛酸（LA）对大鼠胶质瘤细胞（C6细胞）缺氧复氧诱导损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法体外常规培养大鼠C6细胞，取对数生长期细胞用于实验。实验分正常组、模型组、10μmol／LLA组、25μmol／LLA组、50μmol／LLA组。后4组细胞建立缺氧复氧模型，缺氧前12h后3组细胞分别加入10、25、50μmol／LLA，正常组和模型组细胞加入等量培养液。复氧12h后MTT检测5组细胞存活率：2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量；流式细胞术、Western blotting分别检测细胞凋亡率和活化caspase-3蛋白的表达。结果与正常组比较，模型组、10、25、50μmol／LLA组细胞存活率降低，凋亡率增高；模型组细胞ROS含量增高，50μmol／LLA组细胞ROS含量降低；模型组、10μmol／LLA组细胞caspase-3蛋白表达增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较，25、50μmol／LLA组细胞存活率升高；10、25、50μmol／LLA组细胞ROS含量降低，凋亡率[（19．2±2．2）％vs（15．2±0．9）％、（13．1±0．7）％、（10．7±1．4）％]降低，caspase-3蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LA对缺氧复氧诱导损伤的C6细胞具有保护作用，其机制可能与清除细胞内过量的ROS、抑制caspase-3途径依赖的细胞凋亡有关。
- 邓后亮张晶晶季爱民
- 关键词：Α-硫辛酸胶质瘤细胞缺氧复氧细胞凋亡
