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肿瘤相关抗原GC结合因子2 shRNA表达载体的构建及鉴定: 2013年; GC结合因子2（GC-binding factor 2, GCF2）是一种转录抑制因子, 因为能与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因启动子上富含GC的序列结合而得名。研究表明, GCF2可通过多种途径参与细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡等进程。GCF2广泛地高表达于肺癌A549细胞、胃腺瘤AGS细胞及白血病K562细胞等人类多种肿瘤细胞, 并且发现GCF2在这些细胞中的高表达与肿瘤细胞增殖、侵袭及肿瘤耐药等密切相关。RNA干扰（RNA interence, RNAi）可特异性地阻断靶基因表达, 是研究基因功能的有效技术。我们的前期研究表明, GCF2是一种肿瘤相关抗原, 在HepG2等肝癌细胞株中高表达[8]。本实验设计针对GCF2 mRNA的干扰序列, 并且与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo重组而构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GCF2, 经酶切和测序鉴定后, 将该重组质粒转染肝癌细胞株HepG2, 以实现对GCF2表达的抑制, 为进一步研究GCF2对肝癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制奠定基础。; 李金平晁耐霞蒋日婷马平陈德凤陈力吴博黄天明莫发荣罗国容; 关键词：肝细胞癌质粒

肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选被引量：7: 2012年; 目的筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础。方法选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高。通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。; 蒋日婷晁耐霞马平李金平罗国容; 关键词：肿瘤相关抗原肝癌蛋白表达

siRNA沉默GC结合因子2表达对BEL-7404细胞增殖和凋亡的影响被引量：6: 2013年; 目的 GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,能抑制富含GC序列启动子的基因转录。GCF2在BEL-7404等肝癌细胞株的高表达可能与肝癌的发生及发展有关。文中通过靶向GCF2的GCF2-siRNA序列沉默GCF2表达,观察GCF2对人肝癌细胞株BEL-7404增殖及凋亡的影响。方法将实验细胞分为GCF2 siRNA转染组(转染GCF2-siRNA)、阴性对照组(转染无关序列)、脂质体对照组(只加Lipofectamine 2000)、常规培养对照组(不加转染试剂和siRNA序列)共4组。使用Lipofectamine 2000将GCF2-siRNA转染BEL-7404细胞,Western blot检测转染后48 h GCF2蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8和AnnexinV/PI-FITC双染流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 GCF2-siRNA可有效下调GCF2表达、抑制BEL-7404细胞的增殖,细胞凋亡率增加。与各对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GCF2可促进肝癌细胞株BEL-7404的增殖,抑制该细胞凋亡,提示GCF2通过对肝癌细胞增殖和凋亡的影响参与肝癌的发生、发展。; 李金平蒋日婷晁耐霞马平陈德凤陈力吴博莫发荣罗国容; 关键词：肝细胞癌肿瘤相关抗原增殖凋亡

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国家自然科学基金(8106016)