国家自然科学基金(81201295)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：吴砂肖强刘璇蒋小滔更多>>
- 相关机构：免疫学教研室南方医科大学南方医院更多>>
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- 重组HBsAg-GFP载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建pCMV-HBsAg-GFP真核表达载体,鉴定重组蛋白在293T细胞中的表达及抗原性。方法:以HBV转基因鼠C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri基因组DNA为模板扩增HBsAg基因片段,并将其插入到带绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pCMV-AC-GFP。通过阳离子聚合物将重组质粒pCMV-HBsAg-GFP转入293T细胞,荧光显微镜观察重组蛋白的表达,ELISA和Western Blotting鉴定其抗原性。结果:1%琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR扩增片段大小符合HBsAg基因699 bp的理论值。重组质粒经PCR、酶切鉴定后也与理论值相符。荧光显微镜显示,转染293T细胞48 h后,约50%呈亮绿色,细胞形态好,荧光表达强度高。ELISA和Western Blotting鉴定结果均为阳性。结论:成功构建了pCMV-HBsAg-GFP真核表达质粒,其表达的重组蛋白与天然HBsAg具有相同的抗原性。
- 刘璇肖强吴砂蒋小滔
- 关键词：乙肝表面抗原真核表达转基因鼠绿色荧光蛋白
