吴阶平医学基金(EGFR07-07)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 相关作者：梁后杰杨黎李建军赵晓昕潘凤更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院贵阳医学院贵阳医学院附属医院更多>>
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- EGFR/IGFR-1β异二聚体形成对吉非替尼抑制结肠癌细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的:观察EGFR(epidermal growth factor receptor)和IGFR-1β(insulin-like growth factor receptor-1β)的相互作用,探讨IGFR-1β对吉非替尼(gefitinib)抑制结肠癌细胞增殖的影响。方法:以免疫共沉淀法和Western blotting检测EGFR和IGFR-1β之间以及受体与下游信号通路蛋白AKT、MAPK的结合。以IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024和吉非替尼单独或联合作用于3种结肠癌细胞(LoVo,HT29,HCT116细胞),MTT法检测细胞增殖率。结果:LoVo细胞(吉非替尼敏感型)在有或无吉非替尼作用下均不出现与EGFR结合的IGFR-1β条带,HT29细胞(吉非替尼中度敏感型)在吉非替尼作用下可见该条带,而HCT116细胞(吉非替尼耐受型)在有或无吉非替尼作用下均可见条带。LoVo细胞的吉非替尼作用组、HT29细胞的联合用药组以及HCT116细胞的AG1024作用组EGFR结合的AKT、MAPK显著减少(P<0.05)。LoVo细胞在吉非替尼组的细胞增殖率较对照组明显下降(P<0.05),AG1024单独组的增殖率无明显降低,联合用药组与吉非替尼单独组相比较并未进一步降低;HT29细胞在单独应用吉非替尼或AG1024时增殖率均无明显降低,联合用药组的增殖率显著下降(P<0.05);HCT116细胞在吉非替尼作用下增殖率无明显降低,但在AG1024作用下增殖率显著降低(P<0.05),联合用药组与AG1024单独作用组相比较并未进一步降低。结论:结肠癌细胞耐受吉非替尼作用可能或者部分可能与EGFR/IGFR-1β异二聚体形成激活IGFR-1β信号通路有关,抑制IGFR-1β活性在一定程度上可以提高结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性。
- 杨黎何建明沈健李建军梁后杰
- 关键词：结肠癌细胞吉非替尼表皮生长因子受体增殖抑制作用
- 吉非替尼联合AG1024抑制结肠癌细胞生长的体外研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨抑制表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子1型受体(IGFR-1)活性对不同结肠癌细胞下游信号通路的影响及其产生的细胞生长抑制效应。方法:选择对EGFR抑制剂吉非替尼敏感性不同的结肠癌细胞,给予IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024和吉非替尼单独或联合作用,以蛋白质印迹法检测EGFR、IGFR-1β及其下游信号蛋白AKT、MAPK表达和活性,以MTT法检测细胞增殖率。结果:LOVO细胞(吉非替尼敏感型)在吉非替尼作用下AKT、MAPK活性被抑制,P<0.05,而不论是否与AG1024联合;HT29细胞(吉非替尼中度敏感型)在吉非替尼和AG1024单独作用下AKT、MAPK活性均抑制不明显,而联合作用则其活性显著被抑制,P<0.05;HCT116细胞在AG1024作用下AKT、MAPK活性被抑制,P<0.05,而不论是否与吉非替尼联合。细胞增殖率显著降低见于吉非替尼作用下的LOVO细胞、吉非替尼联合AG1024作用下的HT29细胞以及AG1024作用下的HCT116细胞(P<0.05)。结论:吉非替尼联合AG1024可阻断下游信号通路的持续活化,在一定程度上可以改善结肠癌细胞对吉非替尼生长抑制作用的耐受。
- 杨黎丁震宇陈玉英潘凤李建军梁后杰
- 关键词：胰岛素样生长因子1微生物敏感性试验
- 结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性与Akt、MAPK表达的关系被引量：4
- 2009年
- 目的检测结肠癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)下游信号蛋白与细胞对EGFR抑制剂吉非替尼敏感性的关系。方法采用免疫细胞化学染色法检测6种结肠癌细胞系(Lovo、HCT116、HT29、LS174T、SW480、SW620)中EGFR蛋白的表达;MTT法观察吉非替尼对细胞生长的抑制作用;Western blotting法检测EGFR的下游信号蛋白Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其磷酸化蛋白的表达水平。结果EGFR蛋白在SW620细胞中无明显表达,而在其他5种细胞中均有表达,尤以Lovo细胞中表达最强。Lovo细胞对吉非替尼的敏感性最高,HT29和SW480敏感性居中,其他3种细胞的敏感性均较差。各细胞系在胎牛血清中和EGF刺激状态下的生长抑制率和IC50值无显著差异。Akt蛋白在各细胞系均有表达且无显著差异;磷酸化Akt(p-Akt)在Lovo和SW620细胞中表达最低(P<0.05),在LS174T细胞中表达最强(P<0.05)。MAPK蛋白在Lovo细胞中表达最低(P<0.05),在LS174T和SW480细胞中表达较强(P<0.05);磷酸化MAPK(p-MAPK)在LS174T细胞中表达最弱(P<0.05)。结论Akt、MAPK及其磷酸化蛋白的表达水平与结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性不一致,提示结肠癌对吉非替尼的反应性不能完全由EGFR表达和活性决定,也与其下游信号蛋白Akt、MAPK无关。
- 杨黎赵晓昕李建军梁后杰
- 关键词：吉非替尼丝裂原活化蛋白激酶药物筛选试验
- 结肠癌细胞株和组织中EGFR、p-EGFR和p-IGFR-1β的表达及意义
- 2009年
- 目的:研究EGFR、p-EGFR和p-IGFR-1β在结肠癌细胞株的表达及其与吉非替尼敏感性的关系,以及在肿瘤组织中的表达状况、相关性及其与临床病理参数的关系。方法:以western blot检测EGFR、p-EGFR和p-IGFR-1β在结肠癌细胞株和组织中的表达,以Quantity One软件测量各蛋白条带的灰度值。结果:EGFR、p-EGFR在Lovo细胞中表达量最高(P<0.05),EGFR在SW620细胞中的表达最低(P<0.05),在HCT116、HT29、LS174T和SW480细胞中的表达差异不显著。p-IGFR-1β在Lovo、HT29和SW480细胞中表达较弱,且在Lovo细胞中表达更弱,但在HCT116、LS174T和SW620细胞中的表达均较强(P<0.05)。结肠癌组织中EGFR表达率为55.6%(10/18),癌旁正常组织为37.5%(3/18),肿瘤组织中有表达增高的趋势;p-EGFR在结肠癌组织表达率为33.3%(6/18),较正常组织的5.6%(1/18)明显增高(P<0.05);p-IGFR-1β在结肠癌组织表达率为44.4%(8/18),较正常组织的11.1%(2/18)明显增高(P<0.05)。EGFR、p-EGFR和p-IGFR-1β相互之间的表达无明显相关性;EGFR、p-EGFR表达与各临床病理参数无明显相关;p-IGFR-1β在淋巴结转移患者中的表达显著增高(P<0.05),且在分期晚的患者中也可观察到这种趋势。结论:结合我们以往的研究结果,p-EGFR表达高伴p-IGFR-1β表达低提示结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性好。p-EGFR和p-IGFR-1β在结肠癌组织中的表达较正常组织明显增高,且p-IGFR-1β表达高可能预示结肠癌患者有较高的转移风险。
- 杨黎蒋金研陈玉英李建军梁后杰
- 关键词：结肠癌表皮生长因子受体
- 靶向表皮生长因子受体抑制剂耐药机制的研究进展被引量：2
- 2009年
- 杨黎梁后杰
- 关键词：肿瘤治疗方案
- EGFR信号通路的活化状态与结肠癌细胞对吉非替尼敏感性的关系被引量：2
- 2009年
- 目的评价表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对不同敏感性结肠癌细胞的生长抑制效应及EGFR下游信号通路蛋白的活化状态。方法取结肠癌细胞(Lovo、HCT116、HT29),用吉非替尼(10μmol/L)处理后,采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;另取细胞,用表皮生长因子(EGF,50ng/ml)或EGF+吉非替尼(5、10μmol/L)处理后,采用Western blotting检测PTEN、EG-FR、Akt、MAPK及其相应的磷酸化蛋白(p-EGFR、p-Akt、p-MAPK)的表达。结果在吉非替尼作用下,G1期细胞比例和凋亡率在Lovo细胞中显著增加,在HT29细胞中仅轻度增加,而在HCT116细胞中无明显变化。在单纯EGF作用下,p-EGFR、p-Akt和p-MAPK在Lovo和HT29细胞中表达增加(P<0.05),而在HCT116细胞中无明显变化。在给予EGF的基础上添加吉非替尼后,Lovo细胞中EGFR、p-EGFR、p-Akt、p-MAPK和HT29细胞中p-EGFR的表达被明显抑制(P<0.05),HCT116细胞中p-EGFR的表达下降不如Lovo和HT29细胞明显;Lovo、HT29和HCT116细胞内PTEN的表达均无明显变化(P>0.05)。结论耐受吉非替尼的细胞表现为其生长不依赖EGFR,且下游信号通路的活化状态不伴随EGFR活性受阻而受抑制。结肠癌细胞对吉非替尼的敏感程度是由细胞对EGFR的依赖性以及EGFR和下游信号通路的伴随性所决定的。
- 杨黎赵晓昕李建军梁后杰
- 关键词：吉非替尼丝裂原活化蛋白激酶PTEN磷酸水解酶
- 结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性与MET和IGFR-1β及其配体IGF-Ⅱ的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨胰岛素样生长因子1型受体β(IGFR-1β)及其配体IGF-Ⅱ和肝细胞生长因子受体(MET)的表达及活性与人结肠癌细胞对吉非替尼敏感性的关系。方法取6种人结肠癌细胞株(Lovo、HCT116、HT29、LS174T、SW480、SW620),采用Westernblotting法检测与表皮生长因子受体(EGFR)相关的酪氨酸激酶受体(IGFR-1β和MET)的基础及磷酸化蛋白表达水平,以及在吉非替尼和(或)EGF作用下各种蛋白的表达情况。采用RT-PCR检测IGF-ⅡmRNA的表达水平。结果MET在LS174T细胞中表达最低,在SW480细胞表达最高,Lovo细胞次之。磷酸化MET(p-MET)在Lovo细胞中表达较弱,与HCT116细胞中的表达比较无明显差异(P>0.05)。IGFR-1β在6种细胞中均有表达,以SW480中表达最强(P<0.05),而HCT116和LS174T中较弱(P<0.05)。p-IG-FR-1β在Lovo、HT29和SW480中表达较弱(P<0.05),在HCT116、LS174T和SW620中细胞表达较强(P<0.05)。在吉非替尼作用下,Lovo和HCT116细胞中IGFR-1β和p-IGFR-1β的表达无明显变化(P>0.05);HT29细胞中IGFR-1β表达无明显改变,但p-IGFR-1β明显升高(P<0.05);HCT116细胞中IGFR-1β的表达较Lovo和HT29细胞更高(P<0.05)。在吉非替尼作用下,HT29细胞中IGF-ⅡmRNA的表达水平明显增加(P<0.05)。结论MET的表达及活化状态与结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性无关,而IGFR-1β的活性及其配体IGF-Ⅱ的自分泌增加与细胞对吉非替尼的耐受相关。
- 杨黎潘凤李建军梁后杰
- 关键词：吉非替尼肝细胞生长因子受体
- 抑制EGFR、IGFR-1β活性对结肠癌细胞周期和凋亡的影响
- 2010年
- 目的:采用EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼与IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024单独或联合作用于结肠癌细胞,探讨抑制EGFR、IGFR-1β活性对细胞周期和凋亡的影响。方法:以流式细胞术检测结肠癌细胞的细胞周期和凋亡,以AnnexinⅤ-FITC/PI双标检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,Lovo细胞G1期阻滞在吉非替尼组和联合用药组较显著(P<0.05),而二者之间差异不明显(P>0.05);AG1024组与对照组比较无差异(P>0.05)。HT29细胞G1期阻滞在联合用药组较显著(P<0.05),吉非替尼组和AG1024组均不显著(P>0.05)。HCT116细胞G1期阻滞在AG1024组和联合用药组较显著(P<0.05),而二者之间差异不明显(P>0.05);吉非替尼组与对照组比较无差异(P>0.05)。Lovo细胞凋亡率增加在吉非替尼组和联合用药组较显著(P<0.05),而二者之间差异不明显(P>0.05);AG1024组的凋亡率无明显增加。HT29细胞凋亡率增加在联合用药组较显著(P<0.05),吉非替尼组和AG1024组均不明显。HCT116细胞凋亡率增加在AG1024组和联合用药组较显著(P<0.05),而二者之间差异不明显(P>0.05);吉非替尼组的凋亡率无明显增加。结论:抑制Lovo细胞的EGFR活性以及抑制HCT116细胞的IGFR-1β活性可分别引起细胞G1期阻滞及诱导凋亡增加,在HT29细胞中产生这种抑制效应则需要同时抑制EGFR、IGFR-1β的活性。
- 杨黎李建军周岚梁后杰
- 关键词：结肠癌吉非替尼细胞周期凋亡
- 结肠癌细胞中GSK-3β活性对EGFR和IGFR-1抑制剂反应性的作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨糖原合成酶激酶3β(glycogen syntheses kinase 3β,GSK-3β)在结肠癌细胞对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼和胰岛素样生长因子1型受体(insulin-like growth factor receptor-1,IGFR-1)抑制剂AG1024反应性中的作用。方法以Western blot检测结肠癌细胞激活型GSK-3β的表达状况;以GSK-3β抑制剂氯化锂(lithium chloride,LiCl)阻断其活性,MTT法观察LiCl对吉非替尼和(或)AG1024诱导的生长抑制作用有无影响;以免疫荧光激光共聚焦显微镜观察激活型GSK-3β在细胞内的表达及其核转位。结果吉非替尼作用下Lovo细胞中激活型GSK-3β明显增加,而在其余细胞中无明显变化。在LiCl作用下,Lovo细胞的增殖率较吉非替尼作用时有所增加(P<0.05);HT29细胞增殖率较吉非替尼联合AG1024作用时升高(P<0.05);HCT116细胞增殖率较AG1024作用时也有所增加(P<0.05)。在吉非替尼和(或)AG1024诱导生长抑制效应的结肠癌细胞中,激活型GSK-3β不仅在细胞内的表达量增加,还出现明显的核转位。结论吉非替尼和AG1024诱导的结肠癌细胞生长抑制依赖于激活GSK-3β,检测GSK-3β活性可在早期阶段反映结肠癌细胞对治疗的反应性。
- 杨黎李建军张艳玲梁后杰
- 关键词：结肠癌细胞系糖原合成酶激酶3Β吉非替尼
