国家自然科学基金(81201273)
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- 高危型HPV-18E6引起小鼠骨髓源性树突细胞p53的磷酸化
- 2016年
- 目的 探讨高危型HPV-18E6对树突细胞中p53蛋白磷酸化的作用。方法 构建真核表达载体pGFP-18E6,转染小鼠骨髓源性的树突细胞,采用磷酸化的p53抗体免疫荧光化学染色,共聚焦显微镜下动态观察其表达水平。选用p53磷酸化位点的抗体（包括Ser6、Ser9、Ser15、Ser20、Ser37、Ser46和Ser392）对GFP-18E6融合蛋白表达的细胞进行免疫细胞化学染色,进一步探讨磷酸化的p53蛋白在转染后12-72 h的动态表达水平。结果 树突细胞在转染pGFP-18E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-18E6主要定位于细胞核内,而对照组只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。GFP-18E6诱导了p53蛋白的Ser15、Ser20和Ser392三个位点磷酸化。激光共聚焦显微镜测量细胞荧光强度显示,GFP-18E6的表达与时间有相关性。结论 高危型HPV-18E6可以诱导树突细胞的p53蛋白发生多个位点的磷酸化,包括Ser15、Ser20和Ser392,p53多个位点磷酸化是病毒宿主相互作用的一种机制。
- 孙丽娜韦超吉兴照李振军
- 关键词：树突细胞
- 高危型HPV-16E6在小鼠骨髓源性树突细胞的表达
- 2013年
- 目的探讨高危型HPV-16E6在树突细胞中的定位。方法构建真核表达载体pGFP-16E6,转染小鼠骨髓源性的树突细胞,在荧光显微镜下动态观察高危型HPV-16E6蛋白在树突细胞内的定位和表达水平。结果树突细胞在分别转染pGFP-16E6和pEGFP-C1质粒后,GFP-16E6主要定位于细胞核内,而对照组的只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。蛋白表达水平的检测表明,在转染树突细胞后的12h,GFP-16E6和GFP蛋白开始表达(荧光强度分别为31.29,39.52),转染后至24h,蛋白表达均到达高峰(荧光强度分别为119.37,134.23),24h后,蛋白表达逐渐降低。结论 HPV-16E6主要定位于树突细胞核内,随时间其蛋白表达水平不同,这为HPV E6的树突细胞疫苗发挥有效的抗癌作用提供理论依据。
- 王淑京黄元铭温晓婷孙丽娜
- 关键词：GFP
- 低危型HPV-11E6在小鼠骨髓源树突细胞中的定位表达及其诱发凋亡的研究
- 2017年
- 目的采用绿色荧光蛋白表达系统追踪低危型HPV-11E6蛋白在树突细胞(dentritic cell,DC)内的表达,探讨低危型HPV-11E6在树突细胞中的定位,观察低危型HPV-11E6蛋白诱导的树突细胞凋亡。方法构建真核表达载体pGFP-11E6,转染小鼠骨髓源树突细胞,荧光显微镜动态观察E6蛋白的定位和表达水平。采用流式细胞术检测转染后24 h低危型HPV-11E6蛋白的凋亡。结果树突细胞在分别转染pGFP-11E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-11E6主要定位于细胞质内;而对照组的只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。蛋白表达水平的检测表明,在转染树突细胞12 h,GFP-11E6和GFP蛋白开始表达(荧光强度分别为73.22,84.34),转染24 h蛋白表达均到达高峰(荧光强度分别为98.25,126.77),转染48 h蛋白表达荧光强度分别为87.46和103.56,转染72 h蛋白表达荧光强度分别为72.11和97.45。Annexin-Ⅴ/PI流式细胞仪检测可见,GFP-11E6转染的细胞发生了凋亡。结论低危型HPV-11E6主要定位于树突细胞质内,并且可以诱导树突细胞凋亡。
- 孙丽娜唐璐吉兴照司晨琛李振军
- 关键词：GFP树突细胞凋亡
- 尖锐湿疣组织p53Ser15蛋白磷酸化的研究
- 2017年
- 目的研究临床收集的尖锐湿疣样本中p53Ser15蛋白的磷酸化状态,初步探讨其磷酸化对尖锐湿疣组织不发生癌变的意义。方法收集了30例临床尖锐湿疣患者的病变组织标本和健康对照,采用石蜡包埋、切片,采用免疫组化的方法进行p53Ser15蛋白的检测。结果 p53Ser15蛋白的检测显示:30份尖锐湿疣皮损组织中25份阳性,阳性率为83.33%,其中强阳性19份,强阳性率为63.33%,阳性表达程度积分为(5.663±0.201)分,p53Ser15在尖锐湿疣皮损中的表达显著高于正常组织(t=39.337,P<0.01)。p53Ser15蛋白主要定位于基底细胞和棘层细胞的细胞浆和细胞核。结论尖锐湿疣组织中p53Ser15磷酸化呈高表达,保护了抗肿瘤蛋白p53不会被降解,可能是尖锐湿疣不发生癌变的原因之一。
- 孙丽娜韦超徐帅李振军
- 关键词：尖锐湿疣磷酸化
