“十一五”国家科技支撑计划(2008BA163B07)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：孟延发李刚锐范翔师慧孟尧更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 黑曲霉脂肪酶的分离纯化及酶学性质的研究被引量：1
- 2014年
- 目的以黑曲霉发酵液为原料，分离纯化脂肪酶，并研究其酶学性质。方法以硫酸铵沉淀、Q—SepharoseFastFlow和SephacrylS-200凝胶层析等方法分离纯化脂肪酶，利用SDS—PAGE、PAGE、IEF—PAGE等方法进行鉴定。结果所得脂肪酶为单一条带，等电点为3．2，天然分子质量为43．7kDa。以P—NPP为底物，在pH6、50℃条件下，K。=15．67mmol·L^-1；脂肪酶对多种油脂均有水解作用；此酶在65℃以下，pH3—12稳定，在50℃、pH4表现出相对高的酶活性；Ca^2＋、Co^2＋、Mn^2＋、Ni^2＋、卵磷脂、胆酸钠对脂肪酶活性有激活作用，Hg^2＋有抑制作用；PMSF对此脂肪酶有特异性修饰作用。结论确定了黑曲霉脂肪酶的部分酶学性质，为脂肪酶的应用提供了理论依据。
- 师慧孟尧范翔李刚锐孟延发
- 关键词：黑曲霉脂肪酶分离纯化
- 兔肌3-磷酸甘油脱氢酶的提纯及性质研究
- 2013年
- 目的:研究兔肌3-磷酸甘油脱氢酶的分离纯化方法及其酶学性质,为测定血清甘油三酯所用酶联试剂的开发提供试验基础和理论依据。方法:通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose、Blue-Sepharose和羟磷灰石纯化兔肌3-磷酸甘油脱氢酶,利用凝胶过滤和梯度PAGE(5%～15%)法测定酶分子量,采用常规酶学动力学分析方法,考察pH、温度、底物浓度以及部分金属离子与有机化合物对酶促反应的影响。结果纯化后的兔肌3-磷酸甘油脱氢酶经PAGE(12%)分析为单一条带;酶分子量为115～122 kDa;酶最适温度45℃,最适pH 9;酸碱稳定范围pH6～9,低于45℃时热稳定性好;最适条件下,以3-磷酸甘油和NAD+为底物,测得酶的Km分别为7.4×10-3mol/L和1.47×10-4mol/L;Ba2+、Mn2+、Fe2+、Al3+、Cu2+、Ni2+、Ag+、Hg2+、NaN3、EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Mg2+、Ca2+、Co2+、Zn2+有一定程度的激活作用,其中Co2+和Zn2+对酶的激活作用能达到200%以上,有机化合物NaF对酶的活性没有影响。
- 王振伟李刚锐李琳俐王帅坤孟延发
- 关键词：纯化动力学性质
- 溶胶凝胶法固定化黑曲霉脂肪酶的性质研究被引量：1
- 2014年
- 近年来溶胶．凝胶法固定脂肪酶已成为研究热点。选用TMOS、MTMS、ETMS和PTMS4种硅烷试剂对黑曲霉脂肪酶进行了固定化研究。固定化的最佳配方为ETMS／TMOS=5：1、水与硅烷试剂分子比为8；固定化脂肪酶的固定率为80．2％、相对活性为136．3％；以乳化橄榄油作为底物，在50℃和pH4．0的条件下，固定化脂肪酶与游离脂肪酶Km分别为1．899×10^-4 M和2．789×10^-4 M；最适反应pH均为pH4．0，固定化脂肪酶在pH4．0～pH5．5之间其活性能保持95％以上；固定化脂肪酶最适反应温度为60℃，较游离脂肪酶提高了10℃；固定化脂肪酶的酸碱稳定性和热稳定性较非固定化酶有显著的提高。固定化脂肪酶的使用寿命和保存稳定性良好，使用12次后仍能够保留71．7％活性，在室温避光条件下保存180天后仍可保留79．2％活性。
- 李刚锐李林俐范翔孟延发
- 关键词：脂肪酶溶胶-凝胶固定化黑曲霉
