首都卫生发展科研专项(2011-1006-01)
- 作品数：6 被引量：36H指数：4
- 相关作者：孙磊綦惠杰永生陈磊高新生更多>>
- 相关机构：北京积水潭医院北京中医药大学第三附属医院北京市大兴区旧宫医院更多>>
- 发文基金：首都卫生发展科研专项北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无细胞支架修复家兔关节软骨缺损的实验研究被引量：5
- 2015年
- [目的]探讨无细胞的软骨修复支架对动物模型关节软骨损伤的修复效果,及其临床应用的可能性和优势。[方法]成年新西兰大白兔构建软骨缺损动物模型。A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为无细胞支架组,植入不含细胞的支架;C组为负载细胞的支架组,植入负载种子细胞的支架。术后6、12周取材,体视显微镜观察、HE染色和甲苯胺蓝染色观察。术后12周的标本参考国际软骨修复协会组织学评分(International Cartilage Repair Society Histological Scoring,ICRS)标准评分,并对修复后新生组织力学性能进行检测。[结果]体视显微镜观察显示:A组,缺损周边仅有少量修复。B、C组,修复平面略低于周边正常组织,关节面较光滑,修复组织与周围软骨整合较好。HE染色与甲苯胺蓝染色显示:A组,缺损区域主要为纤维组织。B、C组,缺损区域中有大量软骨样组织生成。B、C两组评分的差别无统计学意义(P>0.05),但两组的评分均显著高于A组(P<0.05)。生物力学检测结果显示,正常软骨组织压缩模量为(0.61±0.06)MPa,A、B、C三组压缩模量分别为(0.08±0.05)MPa、(0.16±0.06)MPa、(0.22±0.06)MPa。与A组相比,B组与C组的压缩模量均有显著改善,但与正常软骨组织相比仍有明显降低(P<0.05)。[结论]单纯支架植入与支架负载细胞共同植入,对关节软骨的修复效果无显著性差异,提示负载细胞并未对软骨修复效果有明显的改善。因此,本研究基于无需细胞种植的软骨再生技术理念,使用无细胞支架修复关节软骨损伤/缺损,有可能作为一种更为简便的再生医学方法在软骨损伤、缺损的治疗中发挥重要作用。
- 綦惠杰永生陈磊李清海高新生孙磊
- 两种交联剂制备软骨细胞移植支架的比较被引量：4
- 2013年
- 目的试用两种交联剂对小牛真皮基质来源的支架材料进行交联,比较支架的细胞毒性、结构、生物相容性和细胞贴附的差异,为在体动物试验提供实验依据。方法将脱细胞真皮基质分为两组,分别浸入0.05%戊二醛溶液和0.2%水溶性交联剂进行交联,MTT法检测细胞毒性和溶血率。将交联后的支架分别植入大鼠皮下,评价生物相容性。以排液法粗测孔隙率,并在电镜下观察支架的结构和孔隙大小。培养间充质干细胞并贴附于两种方法处理的材料表面,电镜下观察贴附情况。结果以戊二醛溶液和水溶性交联剂两种方法处理的支架细胞毒性检测均合格,溶血率分别为4.61%与2.97%,均符合国家标准。经戊二醛交联的支架生物相容性差,炎症反应始终存在,水溶性交联剂处理的真皮基质组织相容性较好,仅有轻微的炎症反应。水溶性交联剂制备的支架材料孔隙率为84.3%±5.0%,戊二醛制备的支架材料孔隙率为79.7%±10.8%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。戊二醛交联的支架细胞贴附差,而水溶性交联剂制备的支架细胞贴附良好。结论应用水溶性交联剂处理的支架细胞毒性和溶血率检测均合格,具有良好的生物相容性、孔隙率和细胞贴附性,该法可以作为后期制备软骨细胞移植支架的交联方法。
- 綦惠杰永生陈磊陶建峰江建孙磊
- 关键词：细胞毒性
- 脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究被引量：7
- 2017年
- 目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,行成脂和成骨诱导鉴定。小牛真皮通过脱细胞、交联和冻干制备小牛ADM,ADSCs达到一定数量后接种于ADM得到细胞支架复合物。24只新西兰大白兔随机分A、B、C共三组,A组关节软骨缺损处外科缝合细胞支架复合物,B组软骨缺损处外科缝合ADM,C组软骨缺损不做任何处理。分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学检测。结果成功分离鉴定新西兰兔的脂肪干细胞。经重塑后真皮脱细胞基质支架材料表面光滑、孔隙均匀。ADSCs与ADM复合后,缺损处类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化显示,复合支架已被吸收,再生的软骨是阳性。结论新型小牛ADM支架材料与ADSCs生物相容性好,ADSCs与ADM复合向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力。
- 舒雄郑蕊杰永生陈磊靳少锋綦惠孙磊
- 关键词：脂肪干细胞关节软骨
- 脱细胞真皮基质制备及其生物相容性研究被引量：8
- 2014年
- 目的制备脱细胞真皮基质,检测其细胞及组织相容性,探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法取新生小牛背部真皮组织,以0.5%SDS溶液水平振荡脱细胞,0.5%胰蛋白酶行胶原纤维结构重塑,甲醛浸泡进行交联,0.5%硫酸软骨素溶液中超声振荡进行表面修饰,制备脱细胞真皮基质支架材料。乙醇排除法检测结构重塑前后材料孔隙率变化;MTT法检测材料细胞毒性;将材料植入成年SD大鼠背部皮下,评价组织相容性。采用以3∶7比例共培养的第2代新西兰大白兔软骨细胞与骨髓基质细胞作为种子细胞,种植于脱细胞真皮基质支架材料(实验组),48 h后扫描电镜观察细胞黏附情况;RT-PCR和Western blot检测接种于支架的种子细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达,并与单纯培养的种子细胞(对照组)进行比较。结果经0.5%胰蛋白酶溶液结构重塑后的脱细胞真皮基质支架材料表面光滑、孔隙均匀;孔隙率达85.4%±2.8%,显著高于重塑前的支架(72.8%±5.8%)(t=—4.384,P=0.005);细胞毒性检测为1级,合格;埋植于大鼠背部皮下后,随时间延长,组织炎性细胞数呈减少趋势(P<0.05)。种子细胞接种后,扫描电镜示大量细胞贴附于支架上,细胞形态饱满,可见表面微绒毛和分泌现象。RT-PCR与Western blot检测结果示,实验组和对照组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达量比较,差异均无统计学意义(t=1.265,P=0.235;t=0.935,P=0.372)。结论经脱细胞-结构重塑-交联-表面修饰制备的脱细胞真皮基质结构良好,种子细胞能大量黏附于支架材料上,细胞Ⅱ型胶原表达水平无明显改变,有望作为软骨组织工程支架材料。
- 綦惠杰永生陈磊江建高新生孙磊
- 关键词：软骨组织工程脱细胞真皮基质
- 离心重力诱导脂肪间充质干细胞向软骨样细胞分化被引量：2
- 2018年
- 目的探讨离心重力对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)向软骨样细胞分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过加载不同离心力(0、500、1000、2000、2500、3000×g)和持续时间(0、15、30、45、60 min)刺激脂肪干细胞分化为软骨样细胞,并利用荧光定量PCR和Western blot检测Sox 9基因的上调表达来筛选条件,将培养的P3代h ADSCs分3组,对照组(不干预处理)、离心重力组和TGF-β3组(加入TGF-β3成软骨诱导剂),持续培养21 d后,通过阿利辛蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定Ⅱ型胶原基因表达,Western blot进一步检测对照组和离心重力组中Sox 9、β-catenin、GSK3β和p-GSK3β蛋白的表达。结果加载最适的离心重力(2500×g,30 min)刺激h ADSCs后,培养24 h,Sox 9的m RNA和蛋白表达显著上调。阿利辛蓝和苏木精-伊红染色显示,离心重力组和TGF-β3组中软骨表达呈阳性。GAG实验结果显示,TGF-β3组促GAG分泌的能力优于离心重力组(P<0.05),荧光定量PCR结果表明TGF-β3组其Ⅱ型胶原mRNA表达的能力高于离心重力组(P<0.05),Western blot结果显示,相比对照组,离心重力组中β-catenin和p-GSK3β的蛋白表达水平降低,而GSK3β和Sox 9蛋白表达升高。结论离心重力和TGF-β3诱导脂肪干细胞成软骨分化中的表达具有相似的能力,离心重力对h ADSCs诱导成软骨作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。
- 舒雄杰永生郑蕊陈磊靳少锋綦惠孙磊
- 关键词：人脂肪干细胞超重力SOX软骨分化
- 加味阳和汤对膝骨性关节炎病患MMP-3、MMP-9水平的影响研究被引量：15
- 2016年
- 目的:通过对比研究,分析加味阳和汤对膝骨性关节炎(OA)病患血清MMP-3基质金属蛋白酶-3、MMP-9(基质金属蛋白酶-9)的影响,探讨其治疗效果。方法 :以骨伤科收诊的138例膝关节OA病患为研究对象,随机分为治疗组和对照组。两组病患均给予双氯芬酸钠缓释片100mg,连续服用4周。其中治疗组同时加用加味阳和汤。对两组血清MMP-3、MMP-9水平治疗前后的变化进行对比,分析其临床疗效。结果:经过治疗后显示,治疗组和对照组病患MMP-3与MMP-9的水平均下降显著,治疗组明显低于对照组,治疗组总有效率(97.01%)显著高于对照组(84.06%)。两组不良反应对比差异无意义。结论:在治疗膝关节OA时,加味阳和汤可以降低病患血清MMP-3、MMP-9水平,保护软骨基质和细胞,拥有很好的疗效。
- 张晨马建强
