国家科技基础条件平台建设计划(2005DKA21205-4)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 相关作者：黄兵韩红玉赵其平姜连连董辉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学新疆农业大学科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- cDNA文库及其在原虫研究中的应用被引量：5
- 2008年
- cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。由于cDNA文库在基因分离和克隆中具有重要作用,因此其应用也日益广泛。简要介绍自cDNA文库创建以来,发展起来的各类文库及其构建cDNA文库的方法。作者重点阐述了弓形虫、利什曼原虫、阴道毛滴虫、疟原虫等原虫cDNA文库的构建及其应用。
- 闫晓菲韩红玉岳城黄兵
- 关键词：CDNA文库原虫基因克隆
- 鸡堆型艾美耳球虫新基因的克隆与生物信息学分析被引量：3
- 2014年
- 试验旨在对堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊新基因EST序列进行克隆与生物信息学分析。通过RACE技术扩增从E．acervulina cDNA表达文库中筛选获得的EST序列，得到EST全长cDNA序列，利用多种生物信息学分析软件对其编码蛋白进行分析和预测。结果表明，该EST序列为E．acervulina孢子化卵囊阶段新基因，GenBank登录号为EU590120；该基因含1个492 bp的开放阅读框，编码163个氨基酸，理论分子质量为17．049 ku，等电点为6．69，酸性氨基酸8个，碱性氨基酸8个，分子式为C761H1223N199O219S12总平均亲水性（GRAVY）为0．731；该蛋白有信号肽，为分泌性蛋白；具有4个跨膜结构，在105～115、28～32和132～138位之间有很强的疏水性；具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点。因此根据生物信息学全面预测和分析，发现该基因所编码的蛋白具有较多的生物学功能位点和潜在的抗原表位区域。
- 阎晓菲黄兵韩红玉杨斌岳城赵其平姜连连董辉
- 关键词：球虫堆型艾美耳球虫新基因克隆生物信息学
- 鸡球虫18S rRNA基因序列的测定与分析被引量：7
- 2009年
- 为了利用18S rRNA基因进行鸡球虫系统进化分析,对巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)、堆形艾美耳球虫(E.acervulina)3种共8个不同来源的虫株,分别提取总DNA进行18S rRNA基因的扩增和测序;将得到的序列登录GenBank进行同源性和趋异性分析,并结合GenBank中其它原虫的18S rRNA基因序列构建进化树。结果显示扩增获得8株鸡球虫18S rRNA基因长度为1 746～1 756 bp,序列比对显示同种不同株间的同源性大于不同种间的同源性,其中3株E.maxima株间同源性在98.7%～99.3%之间,4株E.tenella株间同源性在99.7%～99.9%之间;不同种间同源性为96.5%～98.1%,其中E.maxima与E.tenella的遗传距离最大,为0.038;E.maxima与E.acervulina的遗传距离最小,为0.021。顶复器门9个不同属所构建的进化树结果显示,E.imeria和等孢属(Isospora)聚为一支,说明亲缘关系比较近。与GenBank中其它5株不同鸡球虫的18S rRNA基因共同构建的进化树显示,3株E.maxima聚为一支,与E.brunetti、E.mitis、E.mivati、E.praecox和E. acervulina聚为一大分支;4株E.tenella与1株E.necatrix共同形成一个分支,说明E.tenella与E.necatrix的亲缘关系最近。本研究证实了在鸡球虫系统进化研究中,18S rRNA基因不仅可以区分不同种,而且有可能成为区分同种不同株的理想靶基因。
- 王鑫韩红玉姜连连赵其平董辉韩静芳黄兵
- 关键词：球虫艾美耳球虫RRNA系统进化
- 堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及鉴定被引量：4
- 2007年
- 构建堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo（dT）12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR法扩增合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于400 bp的片段后,将cDNA与已经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体按一定比例连接,经体外包装,建立堆形艾美耳球虫孢子化卵囊的噬菌体表达文库.随后测定文库容量为4.6×10^6pfu/mL,扩增文库的滴度为4.4×10^10pfu/mL,重组率达到98%,插入片段大小为750-1 000 bp,并从扩增文库中扩增出了堆形艾美耳球虫巨噬细胞游走抑制因子基因片段.
- 闫晓菲韩红玉岳城黄兵赵其平姜连连董辉卞庆松张建哲
- 关键词：球虫堆形艾美耳球虫孢子化卵囊CDNA文库
- 鸡堆型艾美耳球虫生物学方法鉴定
- 2014年
- [目的]确定单卵囊分离获得的鸡球虫种类.[方法]采用生物学方法,测定该鸡球虫寄生部位、最短孢子化时间、潜伏期、孢子化卵囊和孢子囊大小等生物学特征.[结果]该鸡球虫主要寄生于十二指肠,卵囊呈卵圆形,囊壁光滑分为2层,囊内有1～3个折光性颗粒,未见卵囊残体;测100个孢子化卵囊大小为（13 ～22） μm×（11 ～ 16） μm,平均为16.96 μm×12.96 μm,形状指数1.31;测60个孢子囊大小为（8～ 13） μm×（5～8） μm,平均11.22 μm ×6.83 μm;最短孢子化时间为17 h,潜伏期为99 h.[结论]根据该鸡球虫的生物学特征及参考国内外文献,鉴定该鸡球虫为堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）.
- 阎晓菲黄兵韩红玉岳城赵其平姜连连董辉
- 关键词：堆型艾美耳球虫生物学方法
- 巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建被引量：1
- 2008年
- 为构建巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)孢子化卵囊cDNA表达文库,从E.maxima孢子化卵囊中提取总RNA,以总RNA为模板、λTriplex2TM为载体,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒构建全长cDNA表达文库。经测定构建的E.maxima cDNA表达文库的原始文库容量为1×106 pfu/ml,扩增后的文库滴度为5×1010 pfu/ml,重组率为95%,插入片断主要集中在0.5～1kb之间。根据已知序列设计引物,能从文库中扩增出编码E.maxima免疫球蛋白重链结合蛋白的基因序列片段。结果表明所构建的E.maxima cDNA表达文库质量良好,为克隆、筛选E.maxima的功能性基因奠定了基础。
- 张建哲韩红玉姜连连董辉赵其平卞庆松闫晓菲黄兵
- 关键词：球虫巨型艾美耳球虫CDNA文库SMART技术
- 鸡堆型艾美耳球虫新基因的克隆与生物信息学分析
- <正>试验旨在对堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)孢子化卵囊新基因EST序列进行克隆与生物信息学分析。通过R.ACE技术扩增从E.acervulina cDNA表达文库中筛选获得的EST序列,得到ES...
- 阎晓菲黄兵韩红玉杨斌岳城赵其平姜连连董辉
- 文献传递
- 鸡堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的免疫学筛选被引量：2
- 2014年
- [目的]寻找鸡球虫保护性抗原基因,为研究基因功能和研制抗鸡球虫疫苗奠定基础.[方法]将纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊于兔皮内多点注射,制备堆型艾美耳球虫抗血清,用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其效价,进行免疫学筛选.利用PCR对获得的阳性克隆进行初步鉴定.[结果]间接酶联免疫吸附试验结果表明堆型艾美耳球虫抗血清检测结果呈阳性,初步筛选到的疑似阳性斑经3次复筛后获得6个阳性克隆,1～3号克隆约为1 000bp,4～6号克隆约为1 500 bp.[结论]对堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cD-NA文库获得的阳性克隆成功进行了免疫学筛选.
- 阎晓菲韩红玉黄兵岳城赵其平姜连连董辉
- 关键词：球虫堆型艾美耳球虫CDNA文库免疫学筛选
- 堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及鉴定
- 构建堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina)孢子化卵囊 cDNA 表达文库,以筛选其功能性基因.用 TRI- ZOL Reagent 试剂提取堆形艾美耳球虫总 RNA,再用 Oligo(dT)-纤维素柱从总...
- 闫晓菲韩红玉岳城黄兵赵其平姜连连董辉卞庆松张建哲
- 关键词：球虫堆形艾美耳球虫孢子化卵囊
- 文献传递
