国家自然科学基金(30801449)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 临床分离MRSA中氨基糖苷类抗生素磷酸化酶的克隆表达与活性测定被引量：1
- 2010年
- 目的:从临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中克隆氨基糖苷类抗生素磷酸化酶基因并异源表达,建立其磷酸化反应的体外测活方法。方法:考察临床分离MRSA对氨基糖苷类抗生素的敏感性,从中克隆磷酸化酶基因,并连入pET28a构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化;使用ESI-MS以及抗菌活性实验测定其磷酸化酶活性。结果:药敏实验表明临床分离的6株MRSA均对氨基糖苷类抗生素不敏感,重组表达克隆到的磷酸化酶,表达产物纯化后的纯度大于90%,体外催化试验表明,重组磷酸化酶2h内可以催化反应体系内的卡那霉素B完全磷酸化。结论:异源表达的氨基糖苷类抗生素磷酸化酶具有很好的活性,体外测活方法可靠快捷,为建立氨基糖苷类抗生素磷酸化酶抑制剂筛选模型打下基础。
- 陈俊升苏敏陈代杰李继安阚士东邵雷
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌磷酸化酶异源表达
- 临床分离MRSA中氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6)′-APH(2″)的克隆表达与活性测定
- 2011年
- 双功能酶AAC(6′)-APH(2″)是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的总DNA中克隆得到AAC(6′)-APH(2″)基因,将该基因插入质粒pET-28a中构建表达载体,然后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21进行异源表达,在IPTG的诱导下产生大量可溶性目标重组蛋白,该重组蛋白经亲和层析分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯度大于90%;建立了此双功能酶的体外测活方法,为建立氨基糖苷类抗生素双功能酶抑制剂筛选模型奠定基础.
- 王春霞陈俊升邵雷陈代杰李继安
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌双功能酶
- 格尔德霉素发酵工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 目的研究格尔德霉素产生菌吸水链霉菌SIPI.A.2039的发酵工艺,以提高产生菌生物合成格尔德霉素的能力。方法以本实验室保藏的吸水链霉菌SIPI.A.2039为出发菌株,从摇床转速、摇瓶装量、碳源、50L发酵罐参数等方面进行发酵工艺的优化研究。结果采用经过优化获得的发酵培养基和培养条件,发酵周期为144h时,格尔德霉素的摇瓶发酵效价可由原来的230μg/mL提高至2500μg/mL。在50L发酵罐中采用优化的溶解氧和补料工艺能够使格尔德霉素的发酵效价达到3700μg/mL,并使发酵周期比摇瓶缩短了48h。结论本实验得到的结果比国内外报道的格尔德霉素的发酵效价提高了两倍以上,该发酵工艺已经达到了产业化的要求。
- 林惠敏尹培军李继安陈代杰
- 关键词：格尔德霉素发酵工艺溶解氧补料
- 犹他游动放线菌中酰胺水解酶基因拷贝数增加对转化棘白菌素B效率的影响
- 2012年
- 目的:利用ΦC31整合酶介导的位点特异性重组方法,构建棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数增加的犹他游动放线菌重组菌株。方法:构建含有棘白菌素B酰胺水解酶基因的基因整合型质粒pYGCQ-03-13,通过属间接合转移的方法将该基因片段转入犹他游动放线菌SIPI-T2001中;利用静息细胞转化法,考察其对转化效率的影响。结果:筛选得到的阳性重组菌株SIPI-GE.T2001,对棘白菌素B的转化效率最高达到61.7%。结论:增加棘白菌素B酰胺水解酶基因拷贝数,有效地提高了犹他游动放线菌对棘白菌素B的转化效率。
- 刘爱娟常青李继安卢亮陈代杰苏敏邵雷
- 关键词：酰胺水解酶生物转化基因重组
