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促红细胞生成素对急性肾损伤微环境下骨髓间充质干细胞分化及分泌功能的影响被引量：5: 2012年; 目的观察经促红细胞生成素（EPO）干预后，体外模拟急性肾损伤（AKI）微环境下培养骨髓间充质干细胞（BM-MSC）的分化及分泌功能变化。方法Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离C57BL／6小鼠BM-MSC（mBM-MSC）。构建缺血再灌注（I／R）诱导AKI小鼠模型，制作健康小鼠及I／R小鼠肾脏匀浆上清。取扩增3代的mBM-MSC分组培养：A组：含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液培养；B组：健康小鼠肾脏匀浆上清干预；C组：I／R小鼠肾脏匀浆上清干预，体外模拟AKI微环境；D组：I／R小鼠肾脏匀浆上清＋不同浓度EPO（1、5、10、50U／m1）干预；培养1、3、5、7d。倒置显微镜观察细胞形态，透射电镜观察细胞超微结构，流式细胞仪检测细胞角蛋白18（CKl8），酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中骨形态发生蛋白7（BMP-7）、肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果分离获得的P3一mBM-MSC高表达CD29和CIM4，低表达CD34和CIM5。与A、B组长梭形细胞相比，C组部分细胞出现椭圆形、短梭形、圆形外观，EPO干预可使细胞呈现鹅卵石样外观，且C、D组细胞的胞质内细胞器丰富，并可见微绒毛及桥粒。A、B组mBM-MSC内仅有极微量CKl8表达，C、D组CKl8阳性表达率显著高于A、B组（均P〈0．01），50U／mlEPO干预5、7d后CKl8表达量显著高于同时间点C组（5d：35．22±4．04比8．72±0．38，7d：42．00±5．39比13．20±1．14，均P〈0．01）。A、B组上清液中均见有BMP-7、HGF、VEGF表达，两组间差异无统计学意义，C组表达量均显著低于A、B组（P〈0．05或P〈0．01）。结论EPO干预可增强mBM-MSC的分化功能，并逆转其低分泌效应。; 刘楠梅田军王巍巍韩国锋程劲黄健张金元; 关键词：红细胞生成素间质干细胞细胞分化细胞因子类急性肾损伤

过表达CXCR4的骨髓间充质干细胞对共培养低氧／复氧肾小管上皮细胞的修复作用被引量：3: 2013年; 目的构建CXCR4质粒并转染小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC），与低氧／复氧（hypoxia／re—oxygenation，HR）预处理的肾小管上皮细胞（RTEC）共培养，观察CXCR4-BMSC对HR—RTEC的修复效应并探讨其机制。方法采用基因转染技术获得CXCR4-BMSC（CXCR4-BMSC／eGFP，eGFP为示踪基因）和null—BMSC（BMSC／eGFP），检测转染细胞的CXCR4表达。RTEC于低氧／复氧环境中各培养12h获得HR．RETC，体外模拟急性肾损伤（AKI）细胞模型。BMSC与HR—RTEC共培养12h，免疫荧光法检测HR—RTEC的凋亡细胞比例，Western印迹法检测HR—RTEC内的凋亡相关蛋白cleavedCaspase-3和Bcl．2水平，结晶紫法计数迁移BMSC数量。以HR-RTEC上清液分别干预BMSC、CXCR4-BMSC和null—BMSC，免疫荧光法检测各组BMSC角蛋白18（CKl8）的表达，ELISA法检测BMSC上清中骨形态发生蛋白7（BMP-7）、肝细胞生长因子（HGF）和白细胞介素10（IL—lo）的浓度。结果成功转染的CXCR4．BMSC可高效表达CXCR4。HR—RTEC分别与BMSC、CXCR4-BMSC、null—BMSC共培养后，凋亡细胞比例均有下降，尤以与CXCR4．BMSC共培养组降低最为明显，并伴随着细胞内cleavedCaspase．3水平显著降低、Bcl-2表达升高（均P〈0．05）。结晶紫计数显示CXCR4-BMSC向HR—RTEC培养室的迁移数量最多。经HR—RTEC上清液干预后，BMSC、CXCR4-BMSC和null．BMSC均仅能微量表达CKl8，各组间差异无统计学意义。CXCR4过表达可显著增加BMSC的BMP-7、HGF和IL—10分泌。结论过表达CXCR4的BMSC对共培养HR—RTEC的修复效应增强，BMSC的定向迁移能力增加和迁移BMSC的分泌能力增强可能是CXCR4-BMSC的作用机制。; 刘楠梅梅长林张金元田军程劲; 关键词：骨髓间充质干细胞肾小管上皮细胞低氧复氧 CXCR4

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上海市自然科学基金(11ZRl449600)

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