王宝恩肝纤维化研究基金(xjs001)
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
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- 骨髓间充质干细胞在不同培养体系中对肝星状细胞的影响及其潜在机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞（BMMSC）在不同共培养体系与肝星状细胞（HSC）共培养后细胞因子及TLR4通路表达的变化。方法将分离提纯的HSC分别经0、50、100、150 g/L脂多糖处理48 h，细胞增殖（CCK）-8检测HSC增殖率以确定最佳浓度。在该脂多糖浓度下，2×105/mL HSC分为单纯培养组、1∶1与BMMSC直接共培养组和Transwell共培养组，检测各组上清液IL-6、TNF-α。再将细胞分为无脂多糖下BMMSC组、HSC组、脂多糖＋BMMSC组、脂多糖＋HSC组、Transwell HSC组、Transwell所有细胞组、直接共培养所有细胞组，用实时荧光定量PCR检测各组α-肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原mRNA表达水平，用蛋白质印迹法检测TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、核因子-κB蛋白表达。各样本均数比较采用单因素方差分析。结果与无脂多糖相比，HSC在50、100、150 g/L脂多糖浓度下增殖率分别为（129.77±11.26）%、（162.90±13.15）%、（55.12±11.6）%，差异均有统计学意义（t值分别为5.91、10.70和8.65，均P〈0.05）。单纯HSC组IL-6和TNF-α浓度分别为（252.02±30.94） ng/L、（148.00±10.27） ng/L，直接共培养组分别为（88.52±6.61） ng/L、（72.63±5.54） ng/L，Transwell共培养组分别为（103.76±7.14） ng/L、（81.79±6.92）ng/L，直接共培养组和Transwell组与单纯HSC组比较差异有统计学意义（t值分别为12.66、15.82和11.81、12.34，均P〈0.05）。直接共培养组与间接共培养组相比差异有统计学意义（t值分别为3.83、2.53，均P〈0.05）。与无脂多糖组相比，HSC在脂多糖中的α-SMA和Ⅰ型胶原表达均有明显增加，差异均有统计学意义（t值分别为14.16、11.84，均P〈0.05）。经与BMMSC Transwell共培养后，Transwell HSC组的α-SMA和Ⅰ型胶原表达均有显著降低，差异均有统计学意义（t值分别为11.98、4.47，均P〈0.05）。Transwell所有细胞组与直接共培养组相比，α-SMA和Ⅰ型胶
- 萧云蕾陈泽黄登肖茜茜王永林许烂漫陈永平
- 关键词：间质干细胞肝星状细胞肝硬化TOLL样受体共培养体系
- 曲古抑菌素A对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响
- 2017年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响。
方法将26只6周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和TSA组，每组6只，另外8只小鼠用于提取肝组织s-100蛋白。模型组和TSA组小鼠腹腔注射s-100和完全弗氏佐剂，建立小鼠自身免疫性肝炎模型，第21天，TSA组小鼠连续7 d腹腔注射TSA 2 mg/（kg·d），对照组和模型组小鼠腹腔注射等量含1%二甲基亚砜的0.9%氯化钠溶液。检测各组小鼠血清ALT和AST水平，观察肝组织病理学。蛋白质免疫法检测肝组织内核因子-κB和乙酰化组蛋白H3；实时定量PCR检测肝组织内核因子-κB、HDAC3、TLR4及TNF-α mRNA水平；ELISA法检测血清TNF-α。各组间比较采用t检验。
结果对照组、模型组和TSA组小鼠血清ALT分别为（122.00±45.29）、（459.33±167.58）和（217.33±49.25） U/L，对照组、TSA组与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为4.76、3.41，均P〈0.05）；AST分别为（127.83±18.55）、（389.67±87.14）和（249.50±71.72） U/L，与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为7.20、3.04，均P〈0.05）。TSA减轻了s-100诱导的肝组织病理炎症；模型组小鼠肝组织中核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA和TLR4 mRNA的相对表达量分别为2.43±0.42、9.51±0.36、10.53±0.74、2.90±0.22和4.50±0.73，较对照组1.28±0.49、1.28±0.49、1.06±0.14、1.72±0.73和1.01±0.31明显升高（t值分别为4.68、37.14、30.69、4.33和10.85，均P〈0.05），TSA组核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA及TLR4 mRNA相对表达量分别为1.30±0.36、1.30±0.36、2.38±0.36、2.13±0.32和2.40±0.51，也明显低于模型组（t值分别为4.58、30.62、24.12、2.81、5.81，均P〈0.05）。对照组、模型组和TSA组小鼠血清TNF-α分别为（122.37±68.12）、（1 361.44±207.13）和�
- 胡恩德昊锦露陈永平陈达之李骥许烂漫陆峰彬陈璐黄瑜
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶曲古抑菌素A核因子-ΚB肝炎自身免疫性
- 门脉右支流速预测肝硬化发生的诊断价值初探被引量：1
- 2015年
- 目的探讨超声检查中门脉右支流速对于预测肝硬化发生的诊断价值。方法对120例慢性肝病患者行超声检查,其中30例为慢性肝炎患者,90例为肝硬化患者,记录其门脉右支流速值,并绘制相应的工作特征曲线,计算曲线下面积（AUC）,评价其对肝硬化的诊断价值。结果门脉右支流速诊断肝硬化的AUC为0.702（可信区间为0.602~0.802）,根据ROC曲线选定的最佳分界点（cut-off）值为15.5 kPa（P〈0.0001）。灵敏度为71.10%,特异度为68%,约登指数0.37。结论门脉右支流速对预测肝硬化发生具有较高的诊断价值。
- 王奇王俐琼张玮
- 关键词：肝硬化
- 姜黄素衍生物C66对转化生长因子-β刺激的大鼠肝星状细胞增殖和活化的研究被引量：1
- 2017年
- 目的观察姜黄素衍生物C66对TGF-β刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖及α-平滑肌动蛋白（R-SMA）、Ⅰ型胶原表达的影响及其与大麻素受体（CB）1的关系。方法体外培养HSC-T6细胞，分为对照组、C66不同浓度组（1、2、5、10和20／,tool／L），细胞计数试剂盒一8检测其吸光度（A）值。选取最佳C66作用浓度及时间，分为对照组、TGF-β干预组、TGF＋β＋CB1拮抗剂组、TGF-β＋C66干预组、TGF-β＋CB1拮抗剂＋C66联合干预组，分别培养48h，以蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR检测CB1、α—SMA、I型胶原蛋白及mRNA的表达，以蛋白质印迹法检测磷酸化c—jun氨基末端激酶（p-JNK）、C—jun氨基末端激酶（JNK）表达水平。多样本均数方差齐性者采用LSD法进行两两比较，方差不齐者采用DunnettT3检验，组间比较采用单因素方差分析。结果C66能有效抑制HSCT6增殖，呈现浓度和时间依赖性，其中10μmol／LC66作用48h对HSC—T6的抑制效果最明显，抑制率为54％。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、Ⅰ型胶原、α-SMA蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（￡值分别为6．188、3．48和20．64，均P〈0．05）。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、I型胶原、Ⅰ-SMAmRNA相对表达显著升高，差异均有统计学意义（￡值分别为4．705、9．492和38．27，均P〈0．05）。与对照相组比，TGF—B1干预组p-JNK水平显著升高，差异有统计学意义（t=9．567，P〈0．05）。结论C66能有效抑制HSC—T6细胞的增殖及胶原合成，且联合使用CB1拮抗剂效果更明显，该过程可能涉及JNK磷酸化水平的调节，有助于理解肝纤维化发生、发展的机制及为治疗肝纤维化寻找新的靶点。
- 陈泽陈达之萧云蕾肖茜茜王永林许烂漫陈永平
- 关键词：姜黄素衍生物肝星状细胞肝纤维化
- 骨形成蛋白-7对肝纤维化表皮生长因子受体表达的影响
- 2014年
- 目的观察肝纤维化小鼠模型中表皮生长因子受体（EGFR）的动态表达，以及骨形成蛋白-7（BMP-7）对其表达的影响，探讨治疗纤维化的新靶点。方法30只健康雄性ICR小鼠随机数字表法分为正常对照组（6只）、肝纤维化模型组（18只，包括4、8、12周3个亚组）和BMP-7干预组（6只），皮下注射四氯化碳制备肝纤维化小鼠模型，BMP-7干预组注射四氯化碳8周后腹腔注射人重组BMP-7，持续4周。采用HE和Manson染色观察肝组织病理变化，并进行肝纤维化半定量评分；下腔静脉采血检测ALT、AST和白蛋白；采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测各组TGF-β1 mRNA和TGF-β1、EGFR、pEGFR蛋白表达情况。计量资料比较采用方差分析，相关性采用Pearson相关分析。结果成功建立小鼠肝纤维化模型，肝纤维化模型组血清ALT、AST均逐渐升高，12周时最高，白蛋白逐渐降低，12周时最低，BMP-7干预组各指标均有所缓解[ALT：（153．9±18．1）U／L比（191．3±24．5）U／L；AST：（177．8±19．2）U／L比（206．6±25．0）U／L；白蛋白：（25．4±0．9）g／L比（22．2±1．2）g／L；均P〈0．053。肝纤维化组随着纤维化的进展，TGF-β1、EGFR及pEGFR的蛋白表达量均逐渐升高，于12周时达到高峰，BMP-7干预后，上述3种蛋白的表达水平均明显降低（TGF-β1：0．256士0．006比0．287±0．014；EGFR：1．061±0．017比1．094±0．014；pEGFR：0．855±0．053比1．007±0．063；均P〈0．05）。直线相关分析显示，TGF-β1与EGFR及pEGFR表达量均呈正相关（rs值分别为0．895、0．859，均P〈0．05）。结论BMP-7能改善小鼠肝纤维化，其作用机制可能是调节EGFR和TGF-β1的表达。
- 王丽萍董进中曹肃婷张赛男林镯王晓东陈永平
- 关键词：肝硬化骨形态发生蛋白质类转化生长因子B1
- 腺苷A2A受体激动剂联合骨髓间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭小鼠负向免疫调节作用的研究被引量：2
- 2017年
- 目的探讨腺苷A2A受体激动剂（CGS21680）联合骨髓间充质干细胞（BMMSC）移植治疗急性肝功能衰竭（ALF）的疗效及可能机制。方法50只6～8周雄性C57BL/6小鼠普通饲养1周后，采用随机数字法将小鼠分为健康对照组6只，模型对照组11只，BMMSC组11只，CGS21680/BMMSC组11只，CGS21680组11只。除健康对照组外，其余小鼠腹腔注射D-GalN和脂多糖建立ALF模型。10 h后，CGS21680/BMMSC组、CGS21680组腹腔注射腺苷A2A受体激动剂CGS21680（2.1 mg/kg）。另外，BMMSC组、CGS21680/BMMSC组尾静脉注射BMMSC 1×10^6/只。24 h后，苏木精-伊红染色观察肝脏组织病理变化，流式细胞仪检测各组小鼠脾脏Treg占CD4＋T淋巴细胞比例变化，ELISA试剂盒检测血清炎性因子IL-6、TNF-ɑ含量，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测肝组织TLR4、核因子-κB表达水平。应用单因素方差分析（one-way ANOVA）和SNK-q检验。结果健康对照组血清IL-6为（23.67±2.97） pg/mL，模型对照组为（151.47±6.03） pg/mL，BMMSC组为（72.10±3.74） pg/mL，CGS21680/BMMSC组为（53.35±2.50） pg/mL，CGS21680组为（84.85±3.25） pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义（t值分别为46.02、25.51、19.58和34.03，均P〈0.01）。健康对照组血清TNF-ɑ水平为（24.62±3.19） pg/mL，模型对照组为（102.25±2.10） pg/mL、BMMSC组为（54.71±2.23） pg/mL，CGS21680/BMMSC组为（42.20±4.72） pg/mL，CGS21680组为（81.76±3.50） pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义（t值分别为46.49、19.97、7.72和29.57，均P〈0.01）。健康对照组脾脏Treg比例与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义（t值分别为51.67、12.22、5.91和18.21，均P〈0.01）。健康对照组肝组织TLR4 mRNA水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义（t值分别为26.31、21.33、1
- 肖茜茜王永林陈泽萧云蕾许烂漫林镯王晓东陈永平
- 关键词：间质干细胞
