国家教育部博士点基金(20050159010)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：赵宁张佳林李铁民程颖刘永锋更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 经脾胰岛移植治疗糖尿病大鼠的可行性被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨经脾胰岛移植治疗糖尿病大鼠的疗效及可行性,建立稳定的胰岛移植新途径。方法:实验于2004-03/2005-03在中国医科大学附属第一医院完成。实验分组:供受鼠均采用Wistar大鼠,供鼠40只,受鼠20只。受鼠随机分为移植组、糖尿病组,每组10只。并另取10只正常大鼠作为正常组,进行对照。实验过程:①受鼠造模:移植前14d,采取链尿霉素化学灼伤法(2%链尿霉素,65mg/kg,腹腔注射)造成糖尿病大鼠模型(连续3d在非禁食情况下,血糖>16.8mmol/L为造模成功)。②供鼠胰岛分离纯化:采用明尼苏达大学改良方法,原位直接灌注消化分离大鼠胰岛。消化的胰腺组织离心,经80目不锈钢筛网过滤后,采用25%,23%,20.5%,11%Ficoll和Hank’s液梯度密度离心(4℃,3000r/min×10min),于23%,11%层交界间吸取胰岛细胞。经Hank’s液洗3次,备用。③经脾胰岛移植:移植组大鼠戊巴比妥麻醉后,经左侧肋缘下切口暴露脾脏。显微镜下手检600～800当量胰岛,以1mLCMRL1066培养液稀释,用10mL注射器直接经脾缓慢输注。糖尿病对照组大鼠注射生理盐水1mL。实验评估:①胰岛双硫腙染色与计数,计算纯化率。②体外葡萄糖刺激实验检测胰岛功能。③移植术后监测血糖、血清胰岛素水平。于术后10d行静脉糖耐量实验。④术后14d切取受体大鼠肝脏和脾脏苏木精-伊红染色及Insulin-6免疫组化染色观察组织形态学变化。结果:①每只供鼠可分离300～400当量胰岛,纯度达85%～90%。②体外葡萄糖刺激实验显示胰岛素刺激指数平均为5.59±0.62,功能良好。③受体糖尿病大鼠术后3-5d空腹血糖降至3.4～5.4mmol/L(平均4.8mmol/L)。胰岛素分泌亦达到正常水平。④移植组糖耐量曲线与正常大鼠相似,K值与正常非糖尿病大鼠差异无显著性(2.802,2.3,P>0.05)。⑤受体大鼠脾脏和肝脏内可见散在的移植胰岛。结论:①移植术后3-5d移植胰岛分泌的胰岛素可使空�
- 程颖张佳林刘永锋李铁民赵宁
- 关键词：胰岛糖尿病
- 血管内皮生长因子促进大鼠的移植胰岛再血管化并提高其存活率被引量：3
- 2007年
- 目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对大鼠的移植胰岛再血管化及对其存活率和功能的影响。方法构建质粒pIRES2-EGFP／VEGF165，以脂质体法在体外转染大鼠（供者）的血管内皮细胞。流式细胞术检测转染效率；免疫组织化学染色检测VEGF的表达。将糖尿病大鼠（受者）随机分为3组，每组10只。对照组：于肾被膜下单纯移植供者的300当量胰岛；实验组和空白转染组除移植供者的300当量胰岛外，分别加入供者的1×10^6个转染了质粒pIRES2-EGFP／vEGF165的血管内皮细胞和未经转染的正常血管内皮细胞。移植后监测受者的血糖及血清胰岛素水平。术后第14天，取受者肾脏，行HE染色及Insulin-6、VEGF和CD34免疫组织化学染色。结果血管内皮细胞中VEGFm的转染效率为13．06％。实验组供者的血管内皮细胞胞核和胞浆中均有VEGF表达。实验组受者于移植术后第3天血糖及胰岛素水平恢复正常；对照组和空白转染组虽有所改善，但未恢复到正常水平，与实验组相比，差异有统计学意义。实验组受者肾被膜下可见成团胰岛，Insulin-6免疫组织化学染色呈阳性，周围及内部有大量内皮细胞；VEGFm及CD34免疫组织化学染色呈阳性。对照组和空白转染组肾被膜下的细胞团中心细胞较少，部分被纤维组织代替，内部仅有少量CD34染色阳性的内皮细胞；Insulin-6免疫组织化学染色仅有少量细胞染成棕黄色；VEGF165免疫组织化学染色呈阴性。结论供者的胰岛与转染了VEGF165的血管内皮细胞共同移植给受者可以促进移植胰岛的再血管化，提高其存活率，并使其功能恢复正常。
- 程颖刘永锋张佳林李铁民赵宁
- 关键词：基因转移技术胰岛内皮细胞
